[發明專利]嵌合抗原受體及其表達基因、雙抗原調節的嵌合抗原受體修飾的T細胞及其應用

有效

• 申請號: 201710792918.8
• 申請日: 2017-09-05
• 公開（公告）號: CN107475275B
• 公開（公告）日: 2021-01-08
• 發明（設計）人: 黃彪;陳雪梅;劉韜
• 申請（專利權）人: 深圳華云生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N5/10;C07K19/00;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 潘艷麗

本發明涉及一種嵌合抗原受體及其表達基因、雙抗原調節的嵌合抗原受體修飾的T細胞及其應用。該嵌合抗原受體表達基因包括第一融合蛋白表達基因和第二融合蛋白表達基因。第一融合蛋白表達基因包括依次連接的粘蛋白?1抗體表達基因、notch受體表達基因及Gal4?VP64轉錄激活蛋白表達基因。第二融合蛋白表達基因包括依次連接的Gal4?UAS啟動子表達基因和間皮素抗體表達基因。這種創新設計的嵌合抗原受體表達基因能夠成功導入T細胞中形成嵌合抗原受體修飾的T細胞，在粘蛋白?1和間皮素雙抗原信號同時存在的條件下才產生免疫反應，實現嵌合抗原受體免疫反應可控，治療副作用少，特異性高。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種嵌合抗原受體及其表達基因、雙抗原調節的嵌合抗原受體修飾的T細胞及其應用。

背景技術

嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor，CAR)是人工構建的融合基因編碼的跨膜分子。一般包括胞外抗原結合域、跨膜結構域和胞內信號傳導結構域組成。CAR-T，即嵌合抗原受體(CAR)修飾的T細胞。CAR-T細胞應用于癌癥治療，顯示了極佳療效和巨大的潛力。如諾華于2015年12月5日在ASH會議上公布了其靶向CD19分子的CAR-T(CTL019)在治療難治、復發急性淋巴性白血病(ALL)方面的2期臨床數據，2期數據與2014年公布的1期數據相似，完全緩解率(CR)分布高達93％(55/59)和92％(36/39)。

傳統的CARs主要可以分為三代，如圖1，第一代CARs通常使用一條信號鏈，稱為“信號1”(signal 1)。第一代CAR-T細胞在臨床試驗中表現出了有限的功效，這可能是由于移植T細胞激活誘導的細胞死亡(activation-induced cell death，AICD)，或者缺乏長期的T細胞擴增。第二代CARs利用第一代CARs作為一種支柱，增加了一個額外的共刺激信號域，稱為“信號2”；因此，相同的受體需傳遞“信號1”和“信號2”以優化T細胞的激活。第二代CAR-T與第一代CAR-T相比，回輸到非霍奇金淋巴瘤患者中的持久性和擴增性增強了。但是究竟哪一種是最佳的第二信號還有待確定。另一個需要解決的問題是，當比較不同的CAR-T細胞設計時，是否持久性和/或擴增性的閾值對產生有效臨床結果是必須的。第三代CARs的信號域包兩個共刺激域，臨床前研究表明，第三代CAR-T細胞比第二代CAR-T細胞具有更強的抗腫瘤效力。

然而，CAR-T細胞應用于癌癥治療，在顯示出療效的同時，伴隨有毒性和風險，甚至導致病人死亡。2016年9月26日，Kite公布了KTE-C19的II期臨床數據的中期分析結果。治療的完全緩解率達到了47％。然而，此次參與試驗的62名患者中，有1/3患者產生了嚴重的神經毒性，18％的患者受到了細胞因子釋放綜合征的影響，2人死于KTE-C19相關的不良反應。

其中，細胞因子釋放綜合癥(cytokines release syndrome，CRS)是最顯著的毒性，為頭號安全風險。細胞因子釋放綜合癥是基于T細胞的激活，是T細胞激活活性的一個反應，所以副作用是與CAR-T的治療機制正相關的臨床反應。高度增殖的T細胞能引起CRS，表現為高熱和肌痛，不穩定的低血壓和呼吸衰竭。這是一個意想不到的結果，因為在臨床前動物模型中沒有出現類似癥狀。從CRS觀察中發現一個關鍵的點，除了預期的效應細胞因子INF-γ外，IL-6在CART治療的細胞指數級增殖期間也會迅速提升。CRS可能直接與另一個毒性相關聯，即巨噬細胞活化綜合征。