[發(fā)明專利]一種同時(shí)檢測(cè)尿液中毒死蜱3種代謝產(chǎn)物的方法及裝置

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710791288.2
• 申請(qǐng)日: 2017-09-05
• 公開（公告）號(hào): CN107389829B
• 公開（公告）日: 2019-10-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐懷洲;吉貴祥;張圣虎;張芹;韓志華;宋寧慧;吳晟旻;劉濟(jì)寧;石利利
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 環(huán)境保護(hù)部南京環(huán)境科學(xué)研究所
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08
• 代理公司: 北京棧橋知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11670
• 代理人: 劉亞娟

1.一種同時(shí)檢測(cè)尿液中毒死蜱3種代謝產(chǎn)物的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(A)目標(biāo)化合物選擇毒死蜱的3種體內(nèi)代謝產(chǎn)物：3,5,6-三氯-2-吡啶醇、磷酸二乙酯、硫代磷酸二乙酯；

(B)酶解：取冰凍尿樣于室溫下緩慢解凍，取10mL尿樣于50mL離心管中，加入4mL 6MHCl振蕩，于80℃水浴條件下水解2h，2h后取出，降至室溫；

(C)提取：尿樣中加入10mL乙腈溶液，3g NaCl，渦旋混合1min后，離心分離，取上層5mL乙腈；

(D)凈化與濃縮：將提取后的乙腈過自制凈化小柱，上樣完畢后，再以5mL乙腈洗脫，收集所有洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，氮?dú)獯蹈珊螅?mL乙腈定容，待測(cè)樣品在-20℃的環(huán)境中避光保存，測(cè)試前加入內(nèi)標(biāo)磷酸二正丁酯；

(E)待測(cè)樣品使用色譜－串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)，色譜選擇超高效液相色譜儀，色譜條件：色譜柱選擇反相C18色譜柱，柱溫為35℃，流動(dòng)相A為0.2‰氨水，流動(dòng)相B為乙腈，進(jìn)樣體積為2μL，質(zhì)譜條件：電離方式電噴霧離子源，負(fù)離子模式，多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)(MRM)，離子源溫度：500℃，離子噴霧電壓：-4500V，氣簾氣(curtain gas,CUR)壓力為35psi，噴霧氣(ion sourcegas 1,GS1)壓力為50psi，輔助加熱氣(ion source gas 2,GS2)壓力為55psi；

所述步驟(E)中的流動(dòng)相流速為0.3mL/min左右，梯度洗脫程序?yàn)?～2min，99％A:1％B，2～3min，70％A:30％B，3～10min，5％A:95％B，10～13min，5％A:95％B，13.1～15min，99％A:1％B。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)檢測(cè)尿液中毒死蜱3種代謝產(chǎn)物的方法，其特征在于，所述步驟(C)中的離心速度為8000r/min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的一種同時(shí)檢測(cè)尿液中毒死蜱3種代謝產(chǎn)物的方法，其特征在于，所述步驟(D)中的自制凈化小柱的配方為100mg PSA、50mg GCB、2g無水Na₂SO₄填充。

4.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的一種同時(shí)檢測(cè)尿液中毒死蜱3種代謝產(chǎn)物的方法，其特征在于，所述步驟(E)中的選擇特征離子對(duì)分別為：3,5,6-三氯-2-吡啶醇：196.0/35.0(m/z)和198.0/35.0(m/z)；磷酸二乙酯：153.0/79.0(m/z)和153.0/125.0(m/z)；硫代磷酸二乙酯：169.0/95.0(m/z)和169.0/141.0(m/z)。