[發明專利]一種提高羔羊體外胚胎發育能力的方法

有效

• 申請號: 201710790139.4
• 申請日: 2017-09-05
• 公開（公告）號: CN107460162B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 侯健;田浩;關宏;閆鳳祥
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N5/075
• 分類號: C12N5/075;C12N5/073
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;白艷

本發明公開了一種提高羔羊體外胚胎發育能力的方法。本發明提供了一種促進羔羊卵子體外成熟的方法，為將離體羔羊的卵母卵丘細胞復合體在添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培養液中進行體外成熟培養，實現促進羔羊卵子體外成熟。本發明用添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培養液來培養羔羊卵母細胞，卵子成熟后通過體外受精生產體外胚胎，可以顯著提高羔羊胚胎的發育能力。該方法簡單易行，材料來源方便。

技術領域

本發明屬于胚胎工程領域，尤其涉及一種提高羔羊體外胚胎發育能力的方法。

背景技術

羔羊胚胎體外生產技術(Juvenile in vitro Embryo Transfer，JIVET)是集超數排卵、活體采卵、卵子體外成熟、體外受精、胚胎體外培養和胚胎移植等技術為一體的綜合技術，其最大特點是以性成熟前幼羔為卵子供體來生產體外胚胎。研究表明，利用相同的激素處理方案，幼羔(4-8周齡)的卵泡發育數是成年羊的10倍以上。因此，幼羔是生產體外胚胎的有效卵子供源。而且，以幼羔為卵子供體，還可以將羊的繁殖年齡提前一年以上。因此，JIVET技術是一項極具應用價值的快速繁育技術。

然而，盡管利用激素誘導可以獲得大量羔羊卵子，但這些卵子的質量層次不齊，導致羔羊體外胚胎的發育能力遠低于成年羊胚胎。羔羊體外胚胎發育能力低的主要原因是卵子成熟度不夠，導致受精后發育潛力不足。在體內，卵泡是卵子發育和成熟的重要場所，卵泡液是卵泡的主要成份，為卵子的發育成熟提供了重要微環境。

這是目前JIVET技術的主要缺陷。如果能夠提高羔羊胚胎的發育能力，就會進一步提升JIVET技術的總體效率，提高這一技術的生產應用水平。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種促進羔羊卵子體外成熟的方法.

本發明提供的方法，為將離體羔羊的卵母卵丘細胞復合體在添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培養液中進行體外成熟培養，實現促進羔羊卵子體外成熟。

上述方法中，所述添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培養液中，所述成年羊卵泡液的體積百分濃度為10％-50％(體積比體積)。

上述方法中，所述添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培養液中，所述成年羊卵泡液的體積百分濃度為20％。

上述方法中，

所述成年羊卵泡液為離體成年羊卵泡液；

所述離體成年羊卵泡液來源于激素誘導成年羊(可以屠宰死亡后取或活體取)或非激素誘導成年羊(屠宰死亡后摘取卵巢然后吸取卵泡液)。

上述方法中，所述添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培養液由TCM199溶液、發情羊血清、FSH(促卵泡素)、LH(促黃體素)、17β-estradiol(17β-雌二醇)、streptomycin(鏈霉素)、penicillin(青霉素)和所述成年羊卵泡液組成；

或，所述發情羊血清、所述FSH、所述LH、所述17β-estradiol、所述streptomycin、所述penicillin和所述成年羊卵泡液的配比200μL：10μg：10μg：1μg：100μg：100IU和所述成年羊卵泡液的配比為100-500μL。

上述方法中，所述發情羊血清在所述促卵子成熟培養液中的體積百分含量為10-50％；

或，所述發情羊血清在所述促卵子成熟培養液中的體積百分含量為20％；

所述FSH在所述促卵子成熟培養液中的濃度為10μg/mL；

所述LH在所述促卵子成熟培養液中的濃度為10μg/mL；

所述β-estradiol在所述促卵子成熟培養液中的濃度為1μg/mL；

所述streptomycin在所述促卵子成熟培養液中的濃度為100μg/mL；