[發(fā)明專利]一種提高羔羊體外胚胎發(fā)育能力的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710790139.4
• 申請日: 2017-09-05
• 公開（公告）號: CN107460162B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 侯健;田浩;關(guān)宏;閆鳳祥
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N5/075
• 分類號: C12N5/075;C12N5/073
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;白艷

1.一種促進羔羊卵子體外成熟的方法，為將4-8周齡離體羔羊的卵母卵丘細(xì)胞復(fù)合體在添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培養(yǎng)液中進行體外成熟培養(yǎng)，實現(xiàn)促進羔羊卵子體外成熟；

所述添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培養(yǎng)液中，所述成年羊卵泡液的體積百分濃度為20％；

所述成年羊卵泡液為離體成年羊卵泡液；

所述離體成年羊卵泡液來源于激素誘導(dǎo)成年羊或非激素誘導(dǎo)成年羊；

所述添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培養(yǎng)液由TCM199溶液、發(fā)情羊血清、FSH、LH、17β-estradiol、streptomycin、penicillin和所述成年羊卵泡液組成；

所述發(fā)情羊血清在所述促卵子成熟培養(yǎng)液中的體積百分含量為20％；

所述FSH在所述促卵子成熟培養(yǎng)液中的濃度為10μg/mL；

所述LH在所述促卵子成熟培養(yǎng)液中的濃度為10μg/mL；

所述17β-estradiol在所述促卵子成熟培養(yǎng)液中的濃度為1μg/mL；

所述streptomycin在所述促卵子成熟培養(yǎng)液中的濃度為100μg/mL；

所述penicillin在所述促卵子成熟培養(yǎng)液中的濃度為100IU/mL；

所述成年羊卵泡液在所述促卵子成熟培養(yǎng)液中的體積百分含量為20％；

所述體外成熟培養(yǎng)的條件為38.5℃，5％CO₂，95％空氣飽和濕度、時間為24h；

或所述羊為綿羊或山羊。

2.一種促進羔羊卵子體外成熟的試劑盒，包括權(quán)利要求1所述方法中的所述添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培養(yǎng)液。

3.權(quán)利要求1所述方法或權(quán)利要求2所述試劑盒在提高羔羊體外胚胎的發(fā)育能力中的應(yīng)用。

4.一種提高羔羊體外胚胎的發(fā)育能力的方法，包括如下步驟：

1)權(quán)利要求1所述方法步驟，得到成熟培養(yǎng)后卵母卵丘細(xì)胞復(fù)合體；

2)從所述成熟培養(yǎng)后卵母卵丘細(xì)胞復(fù)合體中分離得到待授精卵母細(xì)胞，再進行體外受精，生產(chǎn)體外胚胎，實現(xiàn)提高羔羊體外胚胎的發(fā)育能力。