[發明專利]一種利用雞樅菌液體發酵菌絲體制備雞樅菌多糖的方法

在審

• 申請號: 201710788599.3
• 申請日: 2017-09-05
• 公開（公告）號: CN107501430A
• 公開（公告）日: 2017-12-22
• 發明（設計）人: 周關健
• 申請（專利權）人: 廣東日可威食品原料有限公司
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P39/06;A61P3/06
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技術領域

本發明屬于生物工程與技術領域，具體涉及一種利用雞樅菌液體發酵菌絲體制備雞樅菌多糖的方法。

背景技術

雞樅菌又名蟻樅、雞腳麟菇，屬于擔子菌綱、傘菌目、傘菌科、雞樅菌屬。雞樅菌的生長環境極為特殊，與黑翅大白蟻共生，子實體僅能生長在白蟻巢上，目前尚不能人工栽培，因而野生雞樅菌在地域上有較大的分布局限，主要分布于我國福建、云南、四川等地。雞樅菌不但是一種營養豐富、味道鮮美的珍貴食用菌，也是我國傳統的藥用真菌之一。研究表明，雞樅菌多糖(CAP)對高血脂癥小鼠有降低血脂的作用，對高膽固醇血癥大鼠有明顯的抗氧化作用，對急性感染小鼠的白細胞(WBC)、C反應蛋白(CRP)、補體C、免疫球蛋白(IGM)的含量有穩定作用。

目前食用菌多糖的提取工藝研究主要采用：熱水浸提法、微波協同高壓熱水浸提法、超聲波協同高壓熱水浸提法、亞臨界水提取法、堿法提取、有機酸提取、膜分離法、酶解法等提取工藝。其中，水提醇沉是最簡單易行的提取方法，但是這樣的提取方法會同時把不同聚合度和不同的水溶性物質如蛋白質、核酸一起提取出來，且提取效率低，而亞臨界水提取法、堿法提取、有機酸提取及膜分離法也存在能耗大、提取率低等缺陷；微波提取以及超聲波技術雖然一定程度上減少了能耗大的難題，但是食用菌多糖的提取率并沒有明顯的提高。因此，建立更加高效、節能、切實可行的食用菌多糖提取方法具有現實意義。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的是提供一種利用雞樅菌液體發酵菌絲體制備雞樅菌多糖的方法，本發明通過液體發酵的方法培養雞樅菌菌絲體，不僅克服了現有技術中雞樅菌人工栽培困難的問題，且可以大規模生產雞樅菌菌絲體，降低生產成本；其次，本發明將發酵所得菌絲體真空冷凍干燥、超微粉碎后，采用熱水浸提，并協同微波-超聲波技術，顯著提高了雞樅菌多糖的提取率，且所得多糖具有良好的抗氧化和降脂活性。

本發明通過以下技術方案來實現：

一種利用雞樅菌液體發酵菌絲體制備雞樅菌多糖的方法，包括以下步驟：

S1、斜面菌種活化培養：從母種培養基上取1cm²的菌塊，接種到斜面培養基上，擴大培養至菌絲體長滿斜面的2/3以上；

S2、液體菌種的制備：挑取步驟S1中活化好的斜面菌種，將其轉接入液體培養基中，置于搖床中恒溫培養，制得液體菌種；

S3、液體發酵培養：將步驟S2中制得的液體菌種接種到裝有發酵培養基的發酵罐中進行發酵培養，得到包含雞樅菌菌絲體的發酵液，將發酵液過濾，取濾渣，得雞樅菌菌絲體；

S4、真空冷凍干燥：將步驟S3制得的雞樅菌菌絲體放入-26～-32℃冰箱內預凍90～110min，再將其放入真空冷凍干燥機內，啟動真空泵抽真空，干燥至最終水分含量為5～10％；

S5、超微粉碎：將步驟S4制得的雞樅菌菌絲體放入搖式粉碎機中進行間歇式粉碎，然后將粉末過80目篩，得雞樅菌菌絲體粗粉，再將雞樅菌菌絲體粗粉置于超微粉碎機進行粉碎，即得雞樅菌菌絲體超微粉；

S6、水提取：將步驟S5制得的雞樅菌菌絲體超微粉加入蒸餾水中，用超聲波微波組合系統處理后，再用水浴恒溫浸提，浸提完成后6000r/min離心12min，得到上清液A；

S7、色素的去除：按重量比為1:1.5將AB-8樹脂浸泡在95％乙醇中，24h后裝柱水洗至無醇味后，將上清液A加入AB-8樹脂去除色素，AB-8樹脂與上清液體積比為3:5；

S8、醇沉多糖：用旋轉蒸發儀將去除色素的上清液減壓濃縮至原體積的五分之一后，加入3倍體積的95％乙醇，混合均勻，于4℃冰箱中醇沉10h，多糖呈絮狀沉淀析出，5000r/min離心10min，收集沉淀，得雞樅菌粗多糖；

S9、蛋白質的去除：將雞樅菌粗多糖復溶于蒸餾水中，用Sevag法去除溶液中的蛋白質；

S10、精制多糖的制備：向步驟S9所得的去除蛋白質的溶液中加入3倍體積的95％乙醇得到沉淀，5000r/min離心10min，收集沉淀，真空冷凍干燥，得雞樅菌精制多糖，即本發明所述的雞樅菌多糖。

優選地，所述步驟S1中斜面培養基成分為：馬鈴薯200g，葡萄糖27g，酵母浸膏3.0g/L，VB₁3.8mg/L，蛋白胨為1.7g/L，水1L，pH為7.0。

優選地，所述步驟S2中液體培養基配方為：麩皮14g/L、玉米粉11g/L、大豆粉2g/L、KH₂PO₄1.2g/L、MgSO₄0.9g/L、水1L、pH 6.0。