[發(fā)明專(zhuān)利]一種利用雞樅菌液體發(fā)酵菌絲體制備雞樅菌多糖的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710788599.3
• 申請(qǐng)日: 2017-09-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107501430A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-12-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周關(guān)健
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣東日可威食品原料有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C08B37/00
• 分類(lèi)號(hào): C08B37/00;A61K31/715;A61P39/06;A61P3/06
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1.一種利用雞樅菌液體發(fā)酵菌絲體制備雞樅菌多糖的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、斜面菌種活化培養(yǎng)：從母種培養(yǎng)基上取1cm²的菌塊，接種到斜面培養(yǎng)基上，擴(kuò)大培養(yǎng)至菌絲體長(zhǎng)滿(mǎn)斜面的2/3以上；

S2、液體菌種的制備：挑取步驟S1中活化好的斜面菌種，將其轉(zhuǎn)接入液體培養(yǎng)基中，置于搖床中恒溫培養(yǎng)，制得液體菌種；

S3、液體發(fā)酵培養(yǎng)：將步驟S2中制得的液體菌種接種到裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，得到包含雞樅菌菌絲體的發(fā)酵液，將發(fā)酵液過(guò)濾，取濾渣，得雞樅菌菌絲體；

S4、真空冷凍干燥：將步驟S3制得的雞樅菌菌絲體放入-26～-32℃冰箱內(nèi)預(yù)凍90～110min，再將其放入真空冷凍干燥機(jī)內(nèi)，啟動(dòng)真空泵抽真空，干燥至最終水分含量為5～10％；

S5、超微粉碎：將步驟S4制得的雞樅菌菌絲體放入搖式粉碎機(jī)中進(jìn)行間歇式粉碎，然后將粉末過(guò)80目篩，得雞樅菌菌絲體粗粉，再將雞樅菌菌絲體粗粉置于超微粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，即得雞樅菌菌絲體超微粉；

S6、水提取：將步驟S5制得的雞樅菌菌絲體超微粉加入蒸餾水中，用超聲波微波組合系統(tǒng)處理后，再用水浴恒溫浸提，浸提完成后6000r/min離心12min，得到上清液A；

S7、色素的去除：按重量比為1:1.5將AB-8樹(shù)脂浸泡在95％乙醇中，24h后裝柱水洗至無(wú)醇味后，將上清液A加入AB-8樹(shù)脂去除色素，AB-8樹(shù)脂與上清液體積比為3:5；

S8、醇沉多糖：用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將去除色素的上清液減壓濃縮至原體積的五分之一后，加入3倍體積的95％乙醇，混合均勻，于4℃冰箱中醇沉10h，多糖呈絮狀沉淀析出，5000r/min離心10min，收集沉淀，得雞樅菌粗多糖；

S9、蛋白質(zhì)的去除：將雞樅菌粗多糖復(fù)溶于蒸餾水中，用Sevag法去除溶液中的蛋白質(zhì)；

S10、精制多糖的制備：向步驟S9所得的去除蛋白質(zhì)的溶液中加入3倍體積的95％乙醇得到沉淀，5000r/min離心10min，收集沉淀，真空冷凍干燥，得雞樅菌精制多糖，即本發(fā)明所述的雞樅菌多糖。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用雞樅菌液體發(fā)酵菌絲體制備雞樅菌多糖的方法，其特征在于，所述步驟S1中斜面培養(yǎng)基成分為：馬鈴薯200g，葡萄糖27g，酵母浸膏3.0g/L，VB₁3.8mg/L，蛋白胨為1.7g/L，水1L，pH為7.0。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用雞樅菌液體發(fā)酵菌絲體制備雞樅菌多糖的方法，其特征在于，所述步驟S2中液體培養(yǎng)基配方為：麩皮14g/L、玉米粉11g/L、大豆粉2g/L、KH₂PO₄1.2g/L、MgSO₄ 0.9g/L、水1L、pH 6.0。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用雞樅菌液體發(fā)酵菌絲體制備雞樅菌多糖的方法，其特征在于，所述步驟S2中液體培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度23～28℃，培養(yǎng)時(shí)間10～15d，搖床轉(zhuǎn)速170～180r/min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用雞樅菌液體發(fā)酵菌絲體制備雞樅菌多糖的方法，其特征在于，所述步驟S3中發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：麩皮14g/L、玉米粉11g/L、大豆粉2g/L、KH₂PO₄1.2g/L、MgSO₄ 0.9g/L、水1L、pH 6.0。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用雞樅菌液體發(fā)酵菌絲體制備雞樅菌多糖的方法，其特征在于，所述步驟S3中發(fā)酵培養(yǎng)條件為：發(fā)酵溫度25～27℃，發(fā)酵時(shí)間5～10d，搖床轉(zhuǎn)速170～180r/min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用雞樅菌液體發(fā)酵菌絲體制備雞樅菌多糖的方法，其特征在于，所述步驟S4中真空冷凍干燥機(jī)冷阱溫度為-30～-40℃。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用雞樅菌液體發(fā)酵菌絲體制備雞樅菌多糖的方法，其特征在于，所述步驟S5中超微粉碎條件為：粉碎機(jī)風(fēng)速35.3Hz，轉(zhuǎn)速35.57Hz，粉碎時(shí)間20min。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用雞樅菌液體發(fā)酵菌絲體制備雞樅菌多糖的方法，其特征在于，所述步驟S6中雞樅菌菌絲體超微粉與蒸餾水固液比(kg/L)為1:25～35。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用雞樅菌液體發(fā)酵菌絲體制備雞樅菌多糖的方法，其特征在于，所述步驟S6超聲波微波組合系統(tǒng)浸提條件為：超聲功率200W、超聲時(shí)間30min、微波功率400W、微波時(shí)間30s，水浴溫度85～95℃。