[發明專利]多重耐藥鮑曼不動桿菌核酸檢測液相芯片及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201710788426.1
• 申請日: 2017-09-05
• 公開（公告）號: CN107619871A
• 公開（公告）日: 2018-01-23
• 發明（設計）人: 黃寧;宮維平;柳曉
• 申請（專利權）人: 山東立菲生物產業有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C40B40/06;C40B50/06;C12R1/01
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司11429
• 代理人: 李晶晶

1.一種多重耐藥鮑曼不動桿菌核酸檢測液相芯片，包括對應鮑曼不動桿菌不同耐藥基因的微球、探針、特異性引物、生物素結合的引物及鏈霉親和素-藻紅蛋白，

其特征在于：鮑曼不動桿菌8種耐藥基因分別是OXA23、TEM、IMP、VIM、AMPC、AAC3、AAC6’、GYRA；

所述微球是分別與針對上述8種耐藥基因的特異性探針偶聯的8種微球；

所述探針是針對上述8種耐藥基因的氨基化的特異性探針；

所述特異性引物能對上述8種耐藥基因進行特異性擴增；

其探針序列為

耐藥基因探針序列OXA23OX-PF:NH2-TTTTTTTTTAACGTTGGAACATTGGAACTEMTE-PR:NH2-TTTTTTTTTCGTAATTGCGGTAAGAIMPIM-PF1:NH2-TTTTTTCAAGATAATCGGAAGGAVIMVI-PF:NH2-TTTTTTTTAGGCAATGGTCTGCGAAMPCAM-PF1:NH2-TTTTTTTAGATACAGGCAATCTAAC3AAC3-PF3:NH2-TTTTTTAGCGCCAAGCGTTTAAGAAC6’AAC6’-PF3:NH2-TTTTTTTTTACGTGGAACGTAACGGGYRAGY-PF1:NH2-TTTTTTTTACTGCGGAATAGTAGTCGGAT

其引物序列為：

2.一種多重耐藥鮑曼不動桿菌核酸檢測液相芯片的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)微球與氨基化的探針偶聯形成偶聯體，分別選取8種不同熒光色的羧基微球，洗滌、活化羧基微球；以不同微球的順序分別對應地加入針對OXA23、TEM、IMP、VIM、AMPC、AAC3、AAC6’、GYRA耐藥基因的特異性氨基化探針；加入EDC混勻，室溫下，以200～250rpm的轉速放在搖床上孵育120分鐘；重復1～2次；用PBS-TBN洗滌2～3次；分別得到8種不同特異性探針與微球形成的偶聯體；計數單位體積每種微球偶聯體的數，分別于4℃條件下避光保存；使用時，依據檢測項目選擇混合；

(2)將特異性探針與微球偶聯的偶聯體、特異性引物、活化的生物素標記的通用引物、鏈霉親和素-藻紅蛋白按比例配置，得到多重耐藥鮑曼不動桿菌核酸檢測液相芯片。

3.多重耐藥鮑曼不動桿菌核酸檢測液相芯片在檢測試劑中的應用。