[發明專利]一種減少抗豬圓環病毒多克隆抗體中非特異性抗體的方法

有效

• 申請號: 201710787730.4
• 申請日: 2017-09-04
• 公開（公告）號: CN107556380B
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發明（設計）人: 徐家華;陳瑞愛;路靜;張淑瓊;廖世昌;吳達興
• 申請（專利權）人: 肇慶大華農生物藥品有限公司;華南農業大學
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C07K1/14
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 付靜;肖宇揚

本發明公開了一種減少抗豬圓環病毒多克隆抗體中非特異性抗體的方法，具體為：通過應用PK?15細胞碎片及由不同動物血清包被的ELISA板與抗豬圓環病毒多克隆抗體在常溫下培育，使抗豬圓環病毒多克隆抗體中的非特異性抗體與PK?15細胞碎片及ELISA板中的抗原相結合，進而除去抗豬圓環病毒多克隆抗體中的部分非特異性抗體。本發明的方法可以有效降低抗豬圓環病毒多克隆抗體中的非特異性抗體含量。

技術領域

本發明屬于獸用生物制品行業，涉及一種減少抗豬圓環病毒多克隆抗體中非特異性抗體的方法。

背景技術

現有技術中抗豬圓環病毒多克隆抗體的制備主要采用豬圓環病毒作為抗原刺激機體，使機體通過免疫學反應，合成并分泌與抗原有特異性結合能力抗體，進而產生抗豬圓環病毒多克隆抗體。但動物在生長的過程中會接觸或感染無數種微生物，而這些微生物都會刺激機體產生對豬圓環病毒具有非特異性的抗體，導致通過感染機體得到的抗豬圓環病毒多克隆抗體中具有多種非特異性抗體，降低抗豬圓環病毒多克隆抗體中特異性抗體含量，進而導致多克隆抗體會與不同抗原具有非常強的交叉反應，影響抗豬圓環病毒多克隆抗體在生物實驗中的應用。因此，如何減少抗豬圓環病毒多克隆抗體中非特異性抗體對于抗豬圓環病毒多克隆抗體的應用非常重要。

發明內容

本發明提供了一種減少抗豬圓環病毒多克隆抗體中非特異性抗體的方法，以解決現有技術中抗豬圓環病毒的多克隆抗體中非特異性抗體含量過多的問題。

本發明的具體技術方案如下，一種減少抗豬圓環病毒多克隆抗體中非特異性抗體的方法，包括以下步驟：

步驟一：獲取PK-15細胞碎片；

步驟二：分別使用血清含量為1-10vol％的雞血清包被液、牛血清包被液、羊血清包被液、豬血清包被液、小鼠血清包被液、大鼠血清包被液、兔血清包被液包被ELISA板，洗滌后，分別得到包被雞血清、牛血清、羊血清、豬血清、小鼠血清、大鼠血清、兔血清的ELISA板；

步驟三：稀釋抗豬圓環病毒多克隆抗體；

步驟四：取稀釋后的抗豬圓環病毒多克隆抗體與PK-15細胞碎片培育結合，離心，收集上清液；

步驟五：將步驟四所獲得的上清液加入到步驟二所獲得的包被血清的ELISA板中的一種中，培育后收集ELISA板中液體；

步驟六：將步驟五所獲得的液體加入到剩下的包被血清的ELISA板中的一種中，培育后收集ELISA板中液體，重復步驟六，直到液體與所有的包被血清的ELISA板均進行過接觸培育，最終收集到的液體即為減少了非特異性抗體的抗豬圓環病毒多克隆抗體。

進一步地，步驟一中PK-15細胞碎片通過以下方式獲取：待PK-15細胞生長致密后，去除培養基，消化，1500-3000rpm/min離心后去上清，加入PBS溶液反復凍融后8000rpm/min離心，去上清液，從而獲得PK-15的細胞碎片。

進一步地，步驟二中血清包被液中血清含量為4-8vol％，且包被后的ELISA板使用含有0.05％吐溫的PBS溶液洗滌3次。

進一步地，步驟二中血清包被液中血清含量為5-7vol％。

進一步地，步驟三中使用含有0.005-0.1vol％吐溫-20的PBS溶液稀釋抗豬圓環病毒多克隆抗體，稀釋比例為5-40倍。

進一步地，步驟三中吐溫-20的含量為0.005-0.05vol％，稀釋比例為10-20倍。

進一步地，步驟四中培育結合溫度為常溫，培育結合時間為1-5h，離心轉速為8000rpm/min，離心時間為10-30min。

進一步地，步驟五和步驟六中，培育溫度為常溫，培育時間為2-5h。

進一步地，步驟五和步驟六中培育時間不低于2h。