[發(fā)明專利]一種減少抗豬圓環(huán)病毒多克隆抗體中非特異性抗體的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710787730.4
• 申請日: 2017-09-04
• 公開（公告）號: CN107556380B
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發(fā)明（設計）人: 徐家華;陳瑞愛;路靜;張淑瓊;廖世昌;吳達興
• 申請（專利權）人: 肇慶大華農(nóng)生物藥品有限公司;華南農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C07K1/14
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 付靜;肖宇揚

1.一種減少抗豬圓環(huán)病毒多克隆抗體中非特異性抗體的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一：獲取PK-15細胞碎片；

步驟二：分別使用血清含量為1-10vol％的雞血清包被液、牛血清包被液、羊血清包被液、豬血清包被液、小鼠血清包被液、大鼠血清包被液、兔血清包被液包被ELISA板，洗滌后，分別得到包被雞血清、牛血清、羊血清、豬血清、小鼠血清、大鼠血清、兔血清的ELISA板；

步驟三：稀釋抗豬圓環(huán)病毒多克隆抗體；

步驟四：取稀釋后的抗豬圓環(huán)病毒多克隆抗體與PK-15細胞碎片培育結合，離心，收集上清液；

步驟五：將步驟四所獲得的上清液加入到步驟二所獲得的包被血清的ELISA板中的一種中，培育后收集ELISA板中液體；

步驟六：將步驟五所獲得的液體加入到剩下的包被血清的ELISA板中的一種中，培育后收集ELISA板中液體，重復步驟六，直到液體與所有的包被血清的ELISA板均進行過接觸培育，最終收集到的液體即為減少了非特異性抗體的抗豬圓環(huán)病毒多克隆抗體。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟一中PK-15細胞碎片通過以下方式獲取：待PK-15細胞生長致密后，去除培養(yǎng)基，消化，1500-3000rpm/min離心后去上清，加入PBS溶液反復凍融后8000rpm/min離心，去上清液，從而獲得PK-15的細胞碎片。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟二中血清包被液中血清含量為4-8vol％，且包被后的ELISA板使用含有0.05％吐溫的PBS溶液洗滌3次。

4.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，所述血清包被液中血清含量為5-7vol％。

5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟三中使用含有0.005-0.1vol％吐溫-20的PBS溶液稀釋抗豬圓環(huán)病毒多克隆抗體，稀釋比例為5-40倍。

6.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于，吐溫-20的含量為0.005-0.05vol％，稀釋比例為10-20倍。

7.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟四中培育結合溫度為常溫，培育結合時間為1-5h，離心轉速為8000rpm/min，離心時間為10-30min。

8.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟五和步驟六中，培育溫度為常溫，培育時間為2-5h。

9.根據(jù)權利要求8所述的方法，其特征在于，培育時間不低于2h。

10.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟二中的血清包被液中含有碳酸鹽0.05mol/L，pH值為9-10。