[發明專利]一種檢測中華絨螯蟹特異性免疫球蛋白E方法

有效

• 申請號: 201710786280.7
• 申請日: 2017-09-04
• 公開（公告）號: CN107643404B
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發明（設計）人: 吳靜;云建榮;姚瑞
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/64
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種不以疾病的診斷或治療為目的的中華絨螯蟹特異性免疫球蛋白E檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括以下步驟：

(1)由內含熒光分子的中空介孔二氧化硅連接抗免疫球蛋白E抗體作為熒光探針；

(2)由二氧化硅包覆四氧化三鐵制備所得的Fe₃O₄@SiO₂連接過敏原作為磁性探針；

(3)將步驟(1)的熒光探針和步驟(2)的磁性探針同時加入含有中華絨螯蟹特異性免疫球蛋白E的離體血清中；

(4)孵育，磁分離去上清，采用緩沖液沖洗后加入堿液，然后超聲釋放熒光分子，檢測熒光強度；

(5)構建中華絨螯蟹特異性免疫球蛋白E濃度與熒光強度的回歸方程；

(6)將待檢測離體血清采用相同的方法檢測熒光強度，帶入步驟(5)中的回歸方程，計算待檢測離體血清中特異性免疫球蛋白E濃度。

2.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述熒光探針為粒徑為195-205nm，內徑為120-130nm。

3.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述磁性探針的粒徑為100-120nm。

4.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述方法中離體血清溶液pH 11，孵育時間為60min，孵育溫度為37℃。

5.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述方法具體是采用粒徑為195-205nm，內徑為120-130nm的熒光探針作為抗免疫球蛋白E抗體的載體，粒徑為100-120nm的磁性探針Fe₃O₄@SiO₂作為過敏原載體，兩種材料同時捕獲靶標中華絨螯蟹特異性免疫球蛋白E，檢測熒光強度，帶入構建的回歸方程計算待測離體血清中特異性免疫球蛋白E濃度；所述方法的回歸方程為：y＝2090-11690x，R²＝0.9986，IgE最低檢測限為0.0176ng/mL。

6.根據權利要求5所述方法，其特征在于，所述過敏原為血藍蛋白。

7.一種檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括熒光探針和磁性探針；所述熒光探針由內含熒光分子的中空介孔二氧化硅連接抗免疫球蛋白E抗體得到的；所述磁性探針由二氧化硅包覆四氧化三鐵所得的Fe₃O₄@SiO₂連接過敏原得到的。

8.根據權利要求7所述試劑盒，其特征在于，所述過敏原為血藍蛋白。

9.根據權利要求7所述試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的檢測回歸方程為：y＝2090-11690x，R²＝0.9986，IgE最低檢測限為0.0176ng/mL。