[發明專利]一種檢測中華絨螯蟹特異性免疫球蛋白E方法

有效

• 申請號: 201710786280.7
• 申請日: 2017-09-04
• 公開（公告）號: CN107643404B
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發明（設計）人: 吳靜;云建榮;姚瑞
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/64
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

本發明公開了一種檢測中華絨螯蟹特異性免疫球蛋白E方法，屬于材料與生物醫學交叉領域。本發明采用熒光中空介孔二氧化硅FHMNs作為抗IgE抗體的載體，二氧化硅包覆四氧化三鐵制備所得的Fe₃O₄@SiO₂作為過敏原載體，兩種材料同時捕獲靶標中華絨螯蟹特異性免疫球蛋白E(IgE)，利用抗原抗體特異性反應富集和分離靶標sIgE，利用FHMNs中的熒光分子信號放大低濃度靶標sIgE的信號，將熒光強度與IgE濃度相關聯，快速靈敏的檢測人血中中華絨螯蟹的特異性IgE。本發明有效降低了IgE檢測限，縮短了檢測時間。

技術領域

本發明涉及一種檢測中華絨螯蟹特異性免疫球蛋白E方法，屬于材料與生物醫學交叉領域。

背景技術

蝦、蟹是我國水產品市場上最常見的甲殼類食品，屬于高蛋白、高營養類食物。但同時也是八大類高致敏性食物之一，發生率為15.6％-35％，導致過敏性哮喘、過敏性休克等疾病的發生。

目前，我國在過敏相關研究領域處于起步階段，尚無蝦、蟹類食物過敏癥的相關診斷試劑。臨床上使用的檢測試劑主要依賴進口，如美國FDA認證的Immuno CAP system自動檢測系統，其公認的檢測限為0.24ng/mL，且檢測費用較昂貴，大多數過敏患者不能負擔；臨床上使用較廣的ELISA檢測試劑盒，其檢測限較高，并不能準確鑒定是否為過敏患者。且目前過敏檢測所用過敏原為生物材料粗提產物，粗提產物包含過敏原與非特異性過敏原以及目前尚未定性的疑似過敏原，對過敏檢測結果存在干擾性，且其致敏效率無法達到標準化。同時，過敏性疾病的發生，與個體的遺傳背景、患者的生活居住環境、變應原物種、過敏原接觸史等因素密切相關。因此，很有必要使用純化的甲殼類水產品中主要過敏原開發快速靈敏的檢測方法。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供一種過敏檢測平臺，用于特異性中華絨螯蟹過敏檢測。

本發明的第一個目的是提供一種中華絨螯蟹特異性過敏檢測方法，所述過敏檢測方法包括以下步驟：

(1)由內含熒光分子的中空介孔二氧化硅連接抗免疫球蛋白E抗體作為熒光探針；

(2)由二氧化硅包覆四氧化三鐵制備所得的Fe₃O₄@SiO₂連接過敏原作為磁性探針；

(3)將步驟(1)的熒光探針和步驟(2)的磁性探針同時加入含有中華絨螯蟹特異性免疫球蛋白E的離體血清中；

(4)孵育，離心去上清，采用緩沖液沖洗后加入堿液，然后超聲釋放熒光分子，檢測熒光強度；

(5)構建中華絨螯蟹特異性免疫球蛋白E濃度與熒光強度的回歸方程；

(6)將待檢測離體血清采用相同的方法檢測熒光強度，帶入步驟(5)中的回歸方程，計算待檢測離體血清中特異性免疫球蛋白E濃度。

在本發明的一種實施方式中，所述熒光探針為粒徑195-205nm，內徑為120-130nm。

在本發明的一種實施方式中，所述磁性探針的粒徑為100-120nm。

在本發明的一種實施方式中，所述方法中離體血清溶液pH 11，孵育時間為60min，孵育溫度為37℃。

在本發明的一種實施方式中，所述方法具體是采用粒徑為195-205nm，內徑為120-130nm的熒光探針作為抗免疫球蛋白E抗體的載體，粒徑為100-120nm的磁性探針Fe₃O₄@SiO₂作為過敏原載體，兩種材料同時捕獲靶標中華絨螯蟹特異性免疫球蛋白E，檢測熒光強度，帶入構建的回歸方程計算待測離體血清中特異性免疫球蛋白E濃度；所述方法的回歸方程為：y＝2090-11690x，R²＝0.9986，IgE最低檢測限為0.0176ng/mL。