[發明專利]一種酵母菌和乳酸菌混合同步發酵制備微生態制劑的方法及應用

在審

• 申請號: 201710783514.2
• 申請日: 2017-09-04
• 公開（公告）號: CN107312735A
• 公開（公告）日: 2017-11-03
• 發明（設計）人: 謝鳳行;張峰峰;周可;趙玉潔;趙瓊
• 申請（專利權）人: 天津市農業生物技術研究中心
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/16;C02F3/34;C12R1/25;C12R1/72
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司12207
• 代理人: 朱紅星

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域中的微生物發酵方法，涉及一種產朊假絲酵母和植物乳桿菌混合發酵的方法及制備的微生態制劑在水產養殖中的應用。

背景技術

隨著水產養殖業集約化經營模式的提高，殘存餌料的腐爛、生物代謝物和生物殘體沉積，使池塘有機污染嚴重，導致有害藻類和病菌的大量繁殖，水質惡化。此外，人類生活污水、各種工業廢水、農業退水等的超量排放，進一步污染了養殖用水水源，養殖環境惡化。而抗生素和化學藥品的濫用帶來了藥物在魚蝦體內大量富集殘留和病原菌的抗藥性等問題，導致水產品質量的下降，既危害了人類健康，也污染了環境。

養殖中后期隨著餌料投入量的增加，普遍出現亞硝態氮和氨氮含量偏高現象。亞硝態氮和氨氮中的非離子氨對養殖生物均有很強的毒性。亞硝態氮直接影響養殖生物血液的攜帶氧能力，是誘發爆發性疾病的主要環境因子，其含量的高低直接關系到水質的好壞和養殖能否成功。非離子氨進入養殖生物體內，對酶水解反應和膜穩定性會產生明顯影響，表現為呼吸困難、不攝食、免疫力下降等，養殖生物生長受到抑制甚至中毒死亡。

采用微生物技術修復養殖環境，是水產養殖業健康可持續發展的必然趨勢。酵母菌和乳酸菌是水產養殖中常用的菌種，酵母菌主要用于飼料添加，乳酸菌除了用于飼料添加外對水體中亞硝態氮有較強的去除能力。由酵母菌和乳酸菌組成的復合微生態制劑大多是由單一菌劑分別發酵后按一定比例混合而成，此種方法工作量較大，且植物乳桿菌為兼性厭氧菌，單獨培養需要特殊裝置。酵母菌和乳酸菌有共生作用可以混合發酵，CN101805696B公布了一種除臭酵母菌和乳酸菌共培養方法，該方法步驟為：溫度在20-35℃下，先在發酵罐中通氣攪拌培養酵母菌2-8h，隨后補加乳酸菌菌液，培養18-24h后再次補加乳酸菌菌液培養8-14h，該方法在發酵過程中接種3次增加了染菌風險，所得的菌劑用于垃圾場、餐飲場所、廁所除臭。CN101715877A中酵母菌和乳酸菌放在塑料桶中共培養5-7d，時間周期較長，且發酵過程中需要放氣，所得制劑主要用于提高動物免疫力和消化吸收能力。

針對上述方法存在的不足，本發明對酵母菌和乳酸菌混合發酵進行了改進，所得到的微生態制劑能有效降解水體中亞硝態氮、氨氮和pH。

發明內容

本發明的目的是為養殖水體凈化提供一種酵母菌和乳酸菌混合發酵制備微生態制劑的方法，在保證有效活菌濃度的前提下簡化生產工藝，降低生產成本。

為實現上述目的，本發明公開了如下的技術內容：

一種酵母菌和乳酸菌混合發酵制備微生態制劑的方法，其特征在于按如下的步驟進行：

（a）菌種活化：將產朊假絲酵母菌CGMCC2.281接種到滅菌YPD培養基中，25-30℃振蕩培養20-24h，將植物乳桿菌CGMCC1.511接種到裝有90%MRS滅菌培養基的玻璃瓶中，30-34℃靜置培養24-30h；產朊假絲酵母菌達2.0×10⁸～5.0×10⁸CFU/mL，植物乳桿菌達到5.0×10⁸～8.0×10⁸CFU/mL；所用的YPD培養基指的是：酵母膏10.0g、蛋白胨20.0g、葡萄糖20.0g、蒸餾水1000mL；MRS培養基指的是：蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母菌5.0g、葡萄糖5.0g、吐溫80 1.0mL、磷酸氫二鉀2.0g、乙酸鈉5.0g、檸檬酸三銨2.0g、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.25g、蒸餾水1000mL；

（b）培養基的制備：培養基由下列組分按質量百分比組成，糖蜜1.5-2.5%，酵母膏0.5-0.8%，乙酸鈉0.3-0.5%，檸檬酸氫二銨0.1-0.2%，西紅柿汁5-10%，磷酸二氫鉀0.2%，硫酸錳0.01-0.02%，pH6.0，115℃滅菌20min；

（c）深層混合發酵：用（b）中制備的培養基，同時接入產朊假絲酵母菌和植物乳桿菌種，接種量按發酵液的體積百分比1%-3%接入，菌種體積比為1:1，培養溫度25-31℃，攪拌轉數100-150rpm，發酵時間17-23h；

（d）復合微生態制劑的制備：將（c）中的發酵液與凹凸棒土按質量比1:2混合，晾干得到復合微生態制劑，晾干后復合微生態制劑的含水率為8-12%；

（e）包裝保存：采用帶有塑料內襯的編織袋密封包裝，常溫保存。