[發明專利]一種酵母菌和乳酸菌混合同步發酵制備微生態制劑的方法及應用

在審

• 申請號: 201710783514.2
• 申請日: 2017-09-04
• 公開（公告）號: CN107312735A
• 公開（公告）日: 2017-11-03
• 發明（設計）人: 謝鳳行;張峰峰;周可;趙玉潔;趙瓊
• 申請（專利權）人: 天津市農業生物技術研究中心
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/16;C02F3/34;C12R1/25;C12R1/72
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司12207
• 代理人: 朱紅星

1.一種酵母菌和乳酸菌混合發酵制備微生態制劑的方法，其特征在于按如下的步驟進行：

（a）菌種活化：將產朊假絲酵母菌CGMCC2.281接種到滅菌YPD培養中，25-30℃振蕩培養20-24h，將植物乳桿菌CGMCC1.511接種到裝有90%MRS滅菌培養基的玻璃瓶中，30-34℃靜置培養24-30h；產朊假絲酵母菌達2.0×10⁸～5.0×10⁸CFU/mL，植物乳桿菌達到5.0×10⁸～8.0×10⁸CFU/mL；所述的YPD培養基指的是：酵母膏10.0g、蛋白胨20.0g、葡萄糖20.0g、蒸餾水1000mL；MRS培養基指的是：蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母菌5.0g、葡萄糖5.0g、吐溫80 1.0mL、磷酸氫二鉀2.0g、乙酸鈉5.0g、檸檬酸三銨2.0g、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.25g、蒸餾水1000mL；

（b）培養基的制備：培養基由下列組分按質量百分比組成，糖蜜1.5-2.5%，酵母膏0.5-0.8%，乙酸鈉0.3-0.5%，檸檬酸氫二銨0.1-0.2%，西紅柿汁5-10%，磷酸二氫鉀0.2%，硫酸錳0.01-0.02%，pH6.0，115℃滅菌20min；

（c）深層混合發酵：用（b）中制備的培養基，同時接入產朊假絲酵母菌和植物乳桿菌種，接種量按發酵液的體積百分比1%-3%接入，菌種體積比為1:1，培養溫度25-31℃，攪拌轉數100-150rpm，發酵時間17-23h；

（d）復合微生態制劑的制備：將（c）中的發酵液與凹凸棒土按質量比1:2混合，晾干得到復合微生態制劑，晾干后復合微生態制劑的含水率為8-12%；

（e）包裝保存：采用帶有塑料內襯的編織袋密封包裝，常溫保存。

2.權利要求1所述的混合發酵制備微生態制劑的方法，其特征在于：發酵溫度28℃，攪拌轉數100rpm，發酵20h。

3.權利要求1所述的混合發酵制備微生態制劑的方法，其特征在于發酵培養基配方為(w/w)：糖蜜2.5%，酵母膏0.8%，乙酸鈉0.5%，檸檬酸氫二銨0.2%，西紅柿汁5%，磷酸二氫鉀0.2%，硫酸錳0.02%，pH6.0。

4.權利要求1所述的混合發酵制備微生態制劑的方法，其特征在于：將產朊假絲酵母菌和植物乳桿菌同時接種到200L發酵罐中，產朊假絲酵母菌生長繁殖消耗罐中余氧為植物乳桿菌生長形成一個厭氧環境，使植物乳桿菌快速繁殖，在pH降到4.0以下停止發酵。

5.采用權利要求1所述的方法制備的酵母菌和乳酸菌混合微生態制劑在有效降低水體中pH值和亞硝態、氨氮方面的應用；其中亞硝態去除率為90%，氨氮去除率為84%。