[發明專利]一種微型器官的處理方法

有效

• 申請號: 201710776920.6
• 申請日: 2017-08-30
• 公開（公告）號: CN107560917B
• 公開（公告）日: 2019-10-11
• 發明（設計）人: 陳萍;李田;張亮;陳曦;李亞騰
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30;G01N1/28
• 代理公司: 重慶弘旭專利代理有限責任公司 50209
• 代理人: 文巍

本發明提供了一種微型器官的處理方法，包括：依次將固定后的微型器官在透析液Ⅰ中1～10℃透析2～5天，在透析液Ⅱ中?40～?15℃透析4～8h，所述透析液Ⅰ配方為1M Tris堿液中含10%的Triton?X 100、2%的BSA以及0.05M的NaCl，pH 6.8；透析液Ⅱ配方為體積比為4:1的乙醇和二甲基亞砜。本發明是對微型器官進行定型和整體通透處理，保持其原有形態，實現器官和組織細胞結構形態不變而大分子物質能充分滲透到各個部位的目的。經過這樣處理的微型器官可以利用分子物質的特異性結合反應，再通過相應的觀察手段如熒光顯微鏡等，就可以準確、靈敏地在微型器官上對分子進行細胞或亞細胞定位、定性以及相對定量分析。本發明針對生物領域微小動物內部器官很小、難以實施組織切片技術的困境，發明了一種適合體內微型器官在分子和細胞水平上進行研究的方法。

技術領域

本發明涉及組織器官的處理方法，特別涉及動物體內的微小組織器官。

技術背景

動物機體是各種組織器官的結合體，動物的生命活動必需依靠各個組織器官正常行使各自的生理學和生物學功能來維持。研究組織器官是深入認識動物以及控制和利用動物的前提基礎和重要紐帶。

醫學診斷上常用的組織器官病理檢測方法-組織化學，伴隨分子及細胞生物學的發展，在生物領域升華為免疫組織化學。免疫組織化學是將抗原與抗體結合的免疫反應特異性和組織化學的可見性巧妙地結合起來，在細胞、亞細胞水平檢測抗原物質，對其進行定位、定性及相對定量分析，從而可大大提高研究深度和水平。因此，免疫組織化學技術50年代以來得到快速發展并廣泛應用各個研究領域。科學研究中通用的免疫組化技術是通過對保持原有形態的組織進行連續切片、以每張切片作為抗原-抗體特異性反應單元為基礎來進行蛋白分子在組織中的定性、定位等分析的。但免疫組織化學實驗包括固定→脫水→透明→浸蠟→包埋→切片→貼片→脫蠟→水化→抗原修復→抗體結合染色等多個環節，步驟繁瑣，技術難度高，要想最終獲得滿意結果，需集扎實的技術理論和豐富的操作經驗為一體方可如愿。稍有不慎，組織細胞發生變形或抗體分子滲透性不好，切片組織染色模糊，不能清楚觀察結果。實踐證明，對于一些肉眼下不易觀察的微型組織器官，這個實驗技術開展起來非常困難，尤其是內部組織器官，經過透明處理后光射反差小，可視度低，操作中容易造成1材料發生丟失、2包埋和切片時很難把控材料的位置和方向、3操作當時不可知切片組織是否缺損或完整，這樣所獲的切片組織在方向位置以及完整性上都不能確定。而免疫組化就是以連續組織切片和每張切片的完整性為基礎來判斷反應結果在器官中的具體位置進行定性、定位分析的。因而，實驗中即使獲得一些免疫染色效果好的切片，因不能在器官中進行具體定位而喪失其作用和意義，更不可能拿到全面可靠的結果了。所以，用現有的免疫組織化學手段對內部微型器官進行蛋白分子的定位定性分析，幾乎不能獲得成功。

地球上大部分動物屬于外觀尺寸較小的小型動物，如種類繁多的昆蟲、絕大部分其它無脊椎動物以及少數離奇的脊椎動物等。通常，微小動物的器官很小，原本組織解剖學研究條件要求高，難度大，尤其是一些厚度小于1mm、肉眼下觀察困難、最外層因非角質化或骨質化、一經透明處理后光射反差很小可視度趨近于0的內部微型器官(如不像家蠶幼蟲體壁和頭部等這樣的外部組織器官，為了抵抗尖銳物損傷內部組織，最外層被角質化骨質化，經過透明處理后還保留一定的光射反差和可視度)，在分子水平上進行科學研究時，因沒有合適可行的方法嚴重阻礙了相關研究，成為其深入研究的瓶頸。

發明內容

本發明的目的在于提供一種對于動物體內的微型器官的處理方法，尤其是適用于動物內部器官的處理和研究，其厚度往往在1mm以下，而最外層為非角質化或骨質化的薄膜，柔軟，不能抵抗尖銳物具的機械損傷。

本發明的目的是通過以下措施實現的：