[發明專利]一種微型器官的處理方法有效

申請號：	201710776920.6	申請日：	2017-08-30
公開（公告）號：	CN107560917B	公開（公告）日：	2019-10-11
發明（設計）人：	陳萍;李田;張亮;陳曦;李亞騰	申請（專利權）人：	西南大學
主分類號：	G01N1/30	分類號：	G01N1/30;G01N1/28
代理公司：	重慶弘旭專利代理有限責任公司 50209	代理人：	文巍
地址：	400716***	國省代碼：	重慶;50
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摘要：
搜索關鍵詞：	器官透析液透析配方特異性結合反應大分子物質二甲基亞砜亞細胞定位熒光顯微鏡定量分析分子物質結構形態內部器官生物領域微小動物細胞水平組織切片組織細胞體積比乙醇堿液通透定型靈敏定性體內細胞觀察研究
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【權利要求書】：

1.一種微型器官的處理方法，包括：采用體積比為1:1000的Tween-20和0.01M PBS配置的處理液中輕微震蕩微型器官4次，固定前1次，固定后透析前1次，透析后2次；依次將固定后的微型器官在透析液Ⅰ中1～10℃透析2～5天，在透析液Ⅱ中-40～-15℃透析4～8h，所述透析液Ⅰ配方為1M Tris堿液中含10%的Triton-X 100、2%的BSA 以及0.05M 的NaCl，pH6.8；透析液Ⅱ配方為體積比為4:1的乙醇和二甲基亞砜(DMSO)；所述微型器官是指動物體內的微型器官，厚度在1mm以下。

2.如權利要求1所述的微型器官的處理方法，所述固定是采用溶于0.1M PBS的4%多聚甲醛在1～10℃中浸泡微型器官12～16h。

3.如權利要求1或2所述微型器官的處理方法，所述處理液處理步驟為兩段式，每段采用處理液浸泡3-25min。

4.如權利要求1所述微型器官的處理方法，包括以下步驟：

（1）摘取新鮮的微型器官，在PBS中剔除粘附在上的其它雜物；

（2）用處理液分為兩個階段處理微型器官，每階段3～5min；

（3）用多聚甲醛在1～10℃中固定微型器官12～16h；

（4）用處理液分為兩個階段處理微型器官，每階段10～15min；

（5）將微型器官在透析液Ⅰ中1～10℃透析2～5天；

（6）將微型器官在透析液Ⅱ中-40～-15℃透析4～8h；

（7）用處理液分為兩個階段處理微型器官，每階段10～15 min；

（8）將微型器官進行免疫反應、原位雜交或細胞學其它操作；

（9）用處理液處理微型器官2-3次，每次處理分兩個階段，每段15～25 min；