[發明專利]一種細胞中內源性表達RNA聚合酶的核酸構建物

有效

• 申請號: 201710768550.1
• 申請日: 2017-08-31
• 公開（公告）號: CN109423496B
• 公開（公告）日: 2023-09-15
• 發明（設計）人: 郭敏;代田純;薛銀鴿;李海洋;王海鵬;柴智;劉帥龍;于雪
• 申請（專利權）人: 康碼（上海）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/81
• 分類號: C12N15/81;C12N1/19;C12R1/645
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• 代理人: 暫無信息

1.一種體外無細胞蛋白合成體系，至少包含:

（a）乳酸克魯維酵母細胞提取物；

用于制備所述乳酸克魯維酵母細胞提取物的菌株為經基因改造

的乳酸克魯維酵母菌株，所述基因改造包括：將所述菌株中的KlXRN1敲除并替換為?T7RNA表達盒；

其中，

所述?T7?RNA表達盒含有式（I）所示核酸構建物：

Z1-Z2?(I)

式中，

Z1、Z2?分別為用于構成所述構建物的元件；

各“-”獨立地為鍵或核苷酸連接序列；

Z1?為啟動子元件，所述啟動子元件為?ScRNR2；

所述?Z2?為?T7?RNA?聚合酶的編碼序列；

（b）聚乙二醇；

（c）任選的外源蔗糖；

（d）任選的溶劑，所述溶劑為水或水性溶劑；

（e）核苷三磷酸混合物；

（f）氨基酸混合物；

（g）磷酸肌酸和磷酸肌酸激酶；

（h）不含外源?RNA?聚合酶；

所述體外無細胞蛋白合成體系能夠與編碼外源蛋白的?DNA?模板反應，合成所述外源蛋白。

2.一種體外高通量合成外源蛋白的方法，包括步驟：

(i)?提供權利要求?1?所述的體外無細胞蛋白合成體系；

(ii)?在適合的條件下，添加外源蛋白核苷酸序列，孵育步驟(i)

的體外無細胞蛋白合成體系一段時間?T1，從而合成所述外源蛋白。

3.?根據權利要求?2?所述的方法，其特征在于，還包括步驟：(iii)

任選地從所述體外無細胞蛋白合成體系中，分離或檢測所述外源蛋白。