[發(fā)明專利]一種番茄幼胚培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710765416.6
• 申請日: 2017-08-30
• 公開（公告）號: CN107372119B
• 公開（公告）日: 2019-09-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐明磊;張旭偉;姚會敏;李紅艷;翟賽亞;張雯雯;王艷曉;王婷婷;徐迅;劉冠楠;孫亞楠
• 申請（專利權(quán)）人: 河南質(zhì)量工程職業(yè)學(xué)院
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;A01H4/00
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11491
• 代理人: 趙紅霞

1.一種番茄幼胚培養(yǎng)方法，其特征在于，所述番茄幼胚培養(yǎng)方法包括:

步驟一，消毒操作：采摘目的番茄幼果，先經(jīng)自來水充分沖洗，再用10％次氯酸鈉表面滅菌15min，然后用無菌水沖洗3-5次完成消毒操作；

步驟二，無菌接種：在無菌條件下進(jìn)行取出幼胚、無菌接種于培養(yǎng)基上，每瓶接種10個幼胚，隨時觀察生根生芽情況；

步驟三，培養(yǎng)幼胚：接種后在培養(yǎng)溫度24-26℃，每天光照12h，光照強(qiáng)度2500LX下進(jìn)行人工培養(yǎng)；

步驟四，幼苗轉(zhuǎn)瓶：番茄幼苗生長，進(jìn)行轉(zhuǎn)瓶，使每瓶幼苗數(shù)在5株；

步驟五，煉苗：移栽前要打開瓶口，陰處放置1-3天進(jìn)行煉苗；

步驟六，幼苗移栽：苗高到5-7cm時進(jìn)行移栽，取出移栽到裝有營養(yǎng)土的營養(yǎng)缽中，澆足水；5-7d后，再生植株即可正常生長發(fā)育；

所述培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基附加1.0mg/L 6-BA、1.0mg/L GA₃、0.2mg/L IAA的培養(yǎng)基組合。

2.如權(quán)利要求1所述番茄幼胚培養(yǎng)方法，其特征在于，所述番茄幼胚是胚齡為授粉后30天的未發(fā)育成熟胚。

3.如權(quán)利要求1所述番茄幼胚培養(yǎng)方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基的配制方法為：

步驟1，培養(yǎng)基母液的配制和保存；

①Ⅳ_A

肌醇 20000

②Ⅳ_B

以上各種營養(yǎng)成分的用量，除了母液Ⅰ為20倍濃縮液外，其余的均為200倍濃縮液；上述幾種母液都要單獨(dú)配成1L的貯備液；其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每種母液中的幾種成分稱量完畢后，分別用少量的蒸餾水徹底溶解，然后再將它們混溶，最后定容到1L；

母液Ⅲ的配制方法是：將稱好的FeSO₄·7H₂O和Na₂-EDTA·2H₂O分別放到450mL蒸餾水中，邊加熱邊不斷攪拌使它們?nèi)芙猓缓髮煞N溶液混合，并將pH調(diào)至5.5，最后定容到1L，保存在棕色玻璃瓶中；

各種母液配完后，分別用玻璃瓶貯存，并且貼上標(biāo)簽，注明母液號、配制倍數(shù)、日期，保存在冰箱的冷藏室中；

(5)生長調(diào)節(jié)劑

為了幼胚健康生長，培養(yǎng)基中加入生長調(diào)節(jié)劑：IAA、6-BA、GA₃，并且分別配成0.1mg/mL母液；其配制方法是：分別稱取這3種物質(zhì)各10mg，將GA₃和IAA用1mL無水乙醇預(yù)溶，將6-BA用1mL 0.1mol/L的NaOH溶液溶解，溶解過程需要水浴加熱，最后分別定容至100mL，即得0.1mg/mL的母液；

步驟2，配制培養(yǎng)液；

用量筒或移液管從各種母液中分別取出所需的用量：母液Ⅰ為50mL，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5mL；再取GA₃ 8mL、IAA 2mL、6-BA 10mL，與各種母液一起放入燒杯中；

步驟3，融化瓊脂；

用粗天平分別稱取瓊脂7g、蒸糖25g，放入1 000mL的燒杯中，再加入蒸餾水750mL，用電爐加熱，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀；然后再將配好的混合培養(yǎng)液加入到煮沸的瓊脂中，最后加蒸餾水定容至1 000mL，攪拌均勻；

步驟4，調(diào)pH；

用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中，邊滴邊攪拌，一直到培養(yǎng)基的pH為5.8為止，培養(yǎng)基的pH必須嚴(yán)格控制為5.8；

步驟5，培養(yǎng)基的分裝；

融化的培養(yǎng)基應(yīng)趁熱分裝；分裝時，先將培養(yǎng)基倒入燒杯中，然后將燒杯中的培養(yǎng)基倒入50mL或100mL的錐形瓶中；注意不要讓培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上；錐形瓶中培養(yǎng)基的量為錐形瓶容量的1/5～1/4；每1000mL培養(yǎng)基，可分裝25～30瓶；

培養(yǎng)基分裝完畢后，及時用2塊硫酸紙中間夾1層薄牛皮紙封蓋瓶口，并用線繩捆扎；

每塊硫酸紙大小為9cm×9cm；

步驟6，高壓滅菌；

待需要滅菌的物品碼放完畢，蓋上鍋蓋；在98kPa、121.3℃下，滅菌20min；

滅菌后取出錐形瓶，讓其中的培養(yǎng)基自然冷卻凝固，放置1d后再使用。

4.一種權(quán)利要求3所述的番茄幼胚培養(yǎng)基配制方法配制的培養(yǎng)基。