[發明專利]一種無血清腫瘤干細胞培養基及其應用

有效

• 申請號: 201710765171.7
• 申請日: 2017-08-30
• 公開（公告）號: CN107365747B
• 公開（公告）日: 2020-06-12
• 發明（設計）人: 鄭希;黃華容;劉婷;李冬利;張焜;周仁平;顧為望
• 申請（專利權）人: 五邑大學;江門市大健康國際創新研究院
• 主分類號: C12N5/095
• 分類號: C12N5/095
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 馮劍明

本發明公開了一種無血清腫瘤干細胞培養基，所述無血清腫瘤干細胞培養基含有MCDB153基礎培養基、細胞因子、蛋白多肽、抗生素、腎上腺素、硒、碳酸氫鈉、脂類和紅樹林內生真菌代謝產物4(15)?桉葉烯?5,7?二羥基?1?酮。本發明的腫瘤干細胞培養基不含血清，配方成分確定，具有較高的安全性，該無血清干細胞培養基可從惡性腫瘤細胞株和腫瘤組織中高效地富集腫瘤干細胞，能使腫瘤干細胞穩定生長，并維持其良好的細胞活性和生理特性，非常適合應用于腫瘤細胞及腫瘤干細胞的相關研究領域。

技術領域

本發明屬于細胞生物學研究領域，具體的，本發明涉及一種無血清腫瘤干細胞培養基及其應用，更具體的，本發明涉及一種添加紅樹林內生真菌代謝產物4(15)-桉葉烯-5,7-二羥基-1-酮的無血清腫瘤干細胞培養基及其用于培養腫瘤細胞株的應用。

背景技術

干細胞是一類具有自我更新、多向分化潛能，并能無限增殖分裂的慢周期細胞，其相關研究在生物發育、基因治療、藥物篩選和器官移植等方面發揮著日益重要的作用。近年來，隨著對干細胞生理特性研究的不斷深入，研究者們發現惡性腫瘤進行性生長、復發和轉移等與干細胞諸多基本特性極其相似，因此，干細胞與腫瘤的關系也就成為了當前腫瘤研究領域的一大熱點。腫瘤是一種異質性的組織，腫瘤細胞受復雜的微環境影響，在增殖過程中不斷獲得基因突變，導致腫瘤組織中有多種表型和分化程度不同的腫瘤細胞。腫瘤干細胞(Tumor Stem Cell，TSC；也稱癌干細胞Cancer Stem Cell，CSC)是存在于腫瘤組織中具有自我更新，自我復制能力的細胞，腫瘤干細胞對化療藥物和放射線治療具有很強的耐受性，并且可以分化出不同表型的腫瘤細胞，重建腫瘤組織的異質性。對腫瘤干細胞的深入研究，有助于了解腫瘤發生、發展和轉移的分子機理，對腫瘤的早期檢測、治療和診斷都有重要的臨床意義。因此，從腫瘤細胞中分離富集腫瘤干細胞以及在體外快速培養成為了研究腫瘤干細胞以及臨床研究中的一個重要手段。

目前腫瘤干細胞一般采用含有血清的或不含血清的干細胞培養基，含有血清的培養基容易造成腫瘤干細胞的分化，且培養基所含的血清中有很多未知成分，這些未知成分將對腫瘤干細胞帶來不可預測的影響。無血清的干細胞培養基通常成分比較復雜成本較高，腫瘤干細胞在上述這些培養基中擴增速度也較慢，不易傳代，無法滿足大規模的研究需求。從腫瘤組織消化得來的腫瘤細胞懸液或腫瘤細胞株中分離富集腫瘤干細胞的方法主要有利用細胞表面分子標記物(常用如CD133)通過流式細胞分選得到目的細胞。另一種方法是利用側群(side population,SP)分選分離腫瘤干細胞。由于腫瘤干細胞大多高表達ABCG2(ATP-binding cassette superfamily G member 2)，其可以將藥物有效地泵出胞外，因此在利用Hoechst熒光染料進行流式細胞分選時，就會形成Hoechst低染區，即SP細胞群。上述方法分離富集腫瘤干細胞需要貴重的儀器設備，耗時且費用也較高。

因此，因此迫切需要一種成本低廉、簡單高效的適合于腫瘤干細胞的富集和快速擴增的無血清細胞培養基。

發明內容

紅樹林內生真菌是近年海洋創新藥物研究最為活躍的領域之一。本發明人的研究團隊在紅樹林微生物代謝產物研究過程中發現，紅樹林微生物的大多數代謝產物具有抗氧化、抗炎和促進細胞生長修復的作用。近年來，在深入研究中，本發明人也發現了對干細胞的增生具有促進作用的代謝產物4(15)-桉葉烯-5,7-二羥基-1-酮。

本發明運用紅樹林內生真菌代謝產物為4(15)-桉葉烯-5,7-二羥基-1-酮對干細胞增殖的促進作用，配制含有4(15)-桉葉烯-5,7-二羥基-1-酮干細胞培養基。本發明目的在于提供一種成本低廉、簡單高效的適用于人腫瘤干細胞快速增殖生長的無血清培養基，本發明的另一目的是提供一種無血清腫瘤干細胞培養基的配制方法，本發明的另一目的是提供一種適用于人腫瘤干細胞富集的培養方法。