[發(fā)明專利]一種無(wú)血清腫瘤干細(xì)胞培養(yǎng)基及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710765171.7
• 申請(qǐng)日: 2017-08-30
• 公開（公告）號(hào): CN107365747B
• 公開（公告）日: 2020-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭希;黃華容;劉婷;李冬利;張焜;周仁平;顧為望
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 五邑大學(xué);江門市大健康國(guó)際創(chuàng)新研究院
• 主分類號(hào): C12N5/095
• 分類號(hào): C12N5/095
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 馮劍明

1.一種無(wú)血清腫瘤干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述無(wú)血清腫瘤干細(xì)胞培養(yǎng)基含有：MCDB153基礎(chǔ)培養(yǎng)基、細(xì)胞因子、蛋白多肽、抗生素、腎上腺素、硒、碳酸氫鈉、脂類和紅樹林內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物4(15)-桉葉烯-5,7-二羥基-1-酮，其中具體含量為：

MCDB153基礎(chǔ)培養(yǎng)基：

細(xì)胞因子：

胰島素8-12mg/L，表皮生長(zhǎng)因子0.1-0.2μg/L，胰島素樣生長(zhǎng)因子1 0.3-0.4μg/L

蛋白多肽：

轉(zhuǎn)鐵蛋白5-6mg/L，白蛋白0.1-0.8μg/L，牛腦垂體提取物0.3-0.4mg/L；

抗生素：

青霉素95-105u/L，鏈霉素95-105u/L；

腎上腺素0.3-0.42mg/L；

硒3-8μg/L；

碳酸氫鈉1-1.5g/L；

脂類：

氫化可的松0.3-0.4mg/L，乙醇胺1-3mg/L，油酸4-5μg/L，亞油酸4-5μg/L；

4(15)-桉葉烯-5,7-二羥基-1-酮3-4mg/L。

2.權(quán)利要求1所述的無(wú)血清腫瘤干細(xì)胞培養(yǎng)基的配制方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)以MCDB153為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，再添加入乙醇胺、油酸、亞油酸、硒、碳酸氫鈉，再采用稀鹽酸或稀氫氧化鈉將pH值調(diào)至7.4；

2)在步驟1)所得的溶液中添加入蛋白多肽、細(xì)胞因子、氫化可的松、腎上腺素、4(15)-桉葉烯-5,7-二羥基-1-酮和抗生素；

3)將在步驟2)所得的溶液過(guò)濾并滅菌處理，即得到無(wú)血清腫瘤干細(xì)胞培養(yǎng)基。

3.權(quán)利要求1所述的無(wú)血清腫瘤干細(xì)胞培養(yǎng)基的使用方法，其特征在于，使腫瘤細(xì)胞株在如權(quán)利要求1所述的無(wú)血清腫瘤干細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)；或?qū)⒛[瘤組織的組織塊剪碎或消化成單細(xì)胞接種到如權(quán)利要求1所述的無(wú)血清腫瘤干細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行原代培養(yǎng)，在37℃，5％CO₂環(huán)境下培養(yǎng)6-9天。