[發明專利]林可霉素的檢測凝膠柱及林可霉素的檢測方法

在審

• 申請號: 201710765091.1
• 申請日: 2017-08-30
• 公開（公告）號: CN107389958A
• 公開（公告）日: 2017-11-24
• 發明（設計）人: 蔣文曉;陳獻雄;柯躍斌;翟鵬;呂子全
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: G01N33/94
• 分類號: G01N33/94;G01N33/577
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司44224
• 代理人: 徐春祺

技術領域

本發明涉及檢測技術領域，特別是涉及一種林可霉素的檢測凝膠柱及林可霉素的檢測方法。

背景技術

林可霉素(Lincomycin,LIN)，又名潔霉素，是從鏈霉菌培養液中取得的一種林克酰胺類窄譜抗生素。在獸醫臨床上，林可霉素主要用于治療革蘭氏陽性菌特別是耐青霉素的革蘭氏陽性菌所引起的各種感染，霉形體引起的家禽慢性呼吸道病、豬喘氣病，厭氧菌感染如雞的壞死性腸炎等，也用于治療豬密螺旋體痢疾、弓形體病和狗、貓的放線菌病。林可霉素對由革蘭氏陽性菌和厭氧菌引起的奶牛乳房炎有出眾的療效，可以用于全身或局部治療。在蜂產業生產中主要用于蜜蜂幼蟲細菌病的防治，尤其是革蘭氏陽性的幼蟲芽胞桿菌引起美洲幼蟲腐臭病的防治。在畜牧業生產過程中，獸藥通常添加在飼料或飲水中，用來治療和預防動物疾病，也有一些獸藥(如β-興奮劑類)被用做促生長劑，增加飼料轉化率和瘦肉率，由此可能造成獸藥殘留在動物源性食品中，從而嚴重威脅人類健康(如過敏反應、直接中毒、耐藥性病原菌的擴散等)。消費者若長期攝入含林可霉素類藥物殘留的動物源食品，可引起腎損害，破壞人的造血系統，對過敏體質的人甚至可以導致死亡。此外，動物源性食品中亞劑量林可霉素類藥物可能會誘導細菌耐藥性，導致潛在的公共衛生安全。

許多國家都制定了林可霉素的最高殘留限量(MRLs)標準。中華人民共和國農業部在2002年發布的《動物性食品中獸藥最高殘留限量》規定了林可霉素的在各種動物靶組織殘留限量：牛/羊/豬/禽肌肉中100μg/kg，脂肪中100μg/kg，肝中500μg/kg，腎中1500μg/kg，牛/羊奶中150μg/kg，雞蛋中50μg/kg。日許量(ADI)為0～30μg/kg。上述規定與歐盟的規定相比，除脂肪中為50μg/kg外，其他相同。食品法典委員會的規定除肌肉中為200μg/kg，其他相同。美國和日本的對林可霉素的殘留限量標準也基本一致。

目前林可霉素殘留的檢測方法多數為儀器方法和酶聯免疫分析檢測方法(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)。其中儀器方法如色譜質譜分析法對于大多數的化學污染物殘留分析有足夠的靈敏度，但是檢測除了需要昂貴的分析儀器，還要求技術人員的操作水平和大量的前處理試劑。而且檢測過程前一般要對分析物進行復雜的衍生化處理，前處理過程復雜，耗時高，效率低下，不適用于大量樣本的篩選檢測。高效液相色譜法和液相色譜-串聯質譜法，由于昂貴的儀器設備和繁瑣的過程，不適合現場大量樣本的快速檢測。相比較，酶聯免疫分析檢測方法靈敏度較高，但傳統的酶聯免疫吸附試驗(ELISA法)操作較為復雜，人工誤差比較大，也不適合現場快速檢測。

綜上，傳統的林可霉素的檢測方法均不適合現場大量本的快速檢測。

發明內容

基于此，有必要提供一種能夠進行現場大量本的快速檢測林可霉素的林可霉素的檢測凝膠柱及林可霉素的檢測方法。

一種林可霉素的檢測凝膠柱，包括空心柱以及設置在所述空心柱內的檢測層和質控層，所述空心柱上設有進口和出口，所述檢測層靠近所述進口，所述質控層靠近所述出口；

所述檢測層包括凝膠載體、偶聯在所述凝膠載體上的第一多克隆二抗以及結合在所述第一多克隆二抗上的林可霉素單克隆抗體，其中所述第一多克隆二抗為所述林可霉素單克隆抗體的抗體；

所述質控層包括凝膠載體、偶聯在所述凝膠載體上的第二多克隆二抗以及結合在所述第二多克隆二抗上的抗化學發光標記物抗體，其中所述第二多克隆二抗為所述抗化學發光標記物抗體的抗體。

在一個實施方式中，所述第一多克隆二抗為羊抗鼠二抗，所述林可霉素單克隆抗體為鼠源的林可霉素單克隆抗體。

在一個實施方式中，所述第二多克隆二抗為羊抗兔二抗，所述抗化學發光標記物抗體為兔源的抗HRP多克隆抗體。

在一個實施方式中，所述檢測層和所述質控層之間具有間隙。

在一個實施方式中，所述凝膠載體為經溴化氰活化的瓊脂糖凝膠。

一種林可霉素的檢測方法，包括以下步驟：

將待測樣品加入上述任一項所述的檢測凝膠柱中；

向所述檢測凝膠柱中加入化學發光標記物標記的林可霉素酶標抗原，以使所述化學發光標記物標記的林可霉素酶標抗原與所述待測樣品競爭性結合所述檢測層中的所述林可霉素單克隆抗體；

向所述檢測凝膠柱中加入顯色液，其中，所述顯色液能夠與化學發光標記物反應產生顏色變化；及

根據所述檢測層的顏色和所述質控層的顏色判斷所述待測樣品中是否含有林可霉素。

在一個實施方式中，還包括：