[發明專利]用于檢測雞白痢沙門氏菌的特異性引物、含有該引物的試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201710758494.3
• 申請日: 2017-08-29
• 公開（公告）號: CN107385077B
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 于申業;劉思國;曹俊
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/10;C12N15/11
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

本發明公開了一種用于檢測雞白痢沙門氏菌的特異性引物、含有該引物的試劑盒及其應用。本發明針對雞白痢沙門氏菌的特異性片段，設計了一種用于特異性擴增雞白痢沙門氏菌的引物，并建立了一種能夠直接從糞便、雞蛋和雞肉樣品中檢測雞白痢沙門氏菌的PCR檢測方法，該方法特異性好、靈敏度高、檢測時間短，可以快速準確的檢測出雞白痢沙門氏菌，與22種其他常見致病性沙門氏菌血清型和8種常見非沙門氏菌致病菌的擴增結果均為陰性，并且可以很好的區分大腸埃希氏菌。本發明的提出為雞白痢沙門氏菌的檢測提供了一種快速、有效的技術手段，且該方法操作簡單、對設備的要求低，檢測時間短，能夠滿足大部分家禽養殖廠對雞白痢沙門氏菌快速檢測的需求。

技術領域

本發明涉及一種用于檢測雞白痢沙門氏菌的特異性引物以及含有該引物的試劑盒，還涉及使用所述的引物以及試劑盒快速檢測雞白痢沙門氏菌的特異性PCR方法，本發明屬于生物技術檢測領域，

背景技術

沙門氏菌(Salmonella)是主要的食源性致病菌之一，其血清型眾多，目前已經確定的血清型有2600多種，但只有某些特定的沙門氏菌血清型會感染人和動物。其中，雞白痢沙門氏菌(S.pullorum)是嚴重影響我國禽養殖業發展的宿主特異性病原菌，其傳播范圍廣，致病性強，主要感染21日齡以內的雛雞，可以引起白色下痢，并且雛雞感染后死亡率幾乎100％；然而成年雞感染雞白痢沙門氏菌后通常沒有臨床癥狀，但作為病原攜帶者，不僅可以水平傳播，而且可以垂直傳播。因此，雞白痢沙門氏菌是一種傳播快、危害大的致病性病原菌。及時準確地檢測出雞白痢沙門氏菌，做出相應的防控措施顯得尤為重要。

傳統的沙門氏菌血清學檢測仍然是通過細菌與特異性抗體的凝集反應鑒別其O抗原和H抗原，根據White-Kauffmann-Le Minor抗原表確定沙門氏菌的血清型。但該方法對某些血清型的鑒別容易混淆，甚至無法鑒別，如雞白痢、雞傷寒和腸炎三種沙門氏菌血清型的抗原結構相似，雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌沒有運動性，H抗原檢測結果為陰性，腸炎沙門氏菌H抗原容易發生變異，必須通過常規的生化鑒定才可以進一步確定這三種沙門氏菌血清型，這種常規的檢測方法需要5至7天的時間，過程繁瑣，耗時耗力。PCR作為病原檢測的一種方法表現出巨大的潛力，它在檢測病原菌時具有快速、靈敏、特異等優點。在我國，雞白痢已經是我國家禽最主要的細菌病之一，并且被國家列為規定凈化的細菌病，對雞白痢沙門氏菌進行快速、準確的檢測是凈化和防治雞白痢的關鍵。

張童利等[，王曼宇，曹俊，王忠星，劉思國*，于申業*.雞白痢沙門氏菌與其它致病性沙門氏菌的血清型特異性PCR鑒別檢測方法的建立.中國預防獸醫學報，39(3):215-219，2017]公開了一組用于檢測雞白痢沙門氏菌的引物(SEEP17495-idF：5’CGATAATGGCAACCGCACTG 3’；SEEP17495-idR：5’TGATGTCTGCCCCTTTCGAC 3’)，并建立了檢測一種雞白痢沙門氏菌的方法，實驗證明該方法對于兩株雞白痢沙門氏菌均可以特異性地擴增出356bp的目的片段，但對于7株常見非沙門氏菌致病菌和29株其他常見致病性沙門氏菌血清型的擴增結果均為陰性。但在后續實際應用中發現，使用該文獻所建立的方法不能夠有效區別大腸桿菌，極大影響了檢測結果的準確性。

為此，急需建立一種能夠快速準確的檢測出雞白痢沙門氏菌，并且區別其他常見致病性沙門氏菌血清型和常見非沙門氏菌致病菌，并且可以很好的區分大腸埃希氏菌的PCR檢測方法。

發明內容

針對雞白痢沙門氏菌在檢測過程中容易出現的問題，本發明的目的在于提供一種快速地、特異性地檢測雞白痢沙門氏菌的引物及其檢測方法，該方法不僅能夠區別其他常見致病性沙門氏菌血清型和常見非沙門氏菌致病菌，并且可以很好的區分大腸埃希氏菌。

為了實現上述目的，本發明采用了以下的技術方案：

一種用于檢測雞白痢沙門氏菌的特異性引物，由上游引物和下游引物組成，所述的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的下游引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示。