[發明專利]用于檢測雞白痢沙門氏菌的特異性引物、含有該引物的試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201710758494.3
• 申請日: 2017-08-29
• 公開（公告）號: CN107385077B
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 于申業;劉思國;曹俊
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/10;C12N15/11
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

1.一種用于檢測雞白痢沙門氏菌的特異性引物，其特征在于所述引物由上游引物和下游引物組成，所述的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.含有權利要求1所述的特異性引物的PCR檢測試劑盒。

3.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于還含有PCR擴增緩沖液、陽性對照以及陰性對照。

4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于所述的陽性對照為雞白痢沙門氏菌菌株的基因組DNA或是含有SEQ ID NO.1所示序列的載體；所述的陰性對照為無菌水。

5.如權利要求2-4任一項所述的試劑盒，其特征在于用于檢測雞白痢沙門氏菌時包括以下步驟：

步驟一，提取待檢樣品基因組DNA，使用權利要求2-4任一項所述的試劑盒進行PCR擴增；

步驟二，瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增產物，判斷樣品是否含有雞白痢沙門氏菌；所述判斷具體為：如果電泳結果在219 bp位置出現單一的擴增條帶，則說明樣品中含有雞白痢沙門氏菌；如果沒有出現相應的單一擴增條帶，則樣品中不含有雞白痢沙門氏菌。

6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，在提取待檢樣品基因組DNA之前，還包括使用增菌液對樣本進行增菌培養的步驟，所述增菌液為亞硒酸鹽胱氨酸增菌液或RV沙門氏菌增菌液體培養基。

7.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，采用高溫裂解法提取待檢樣品基因組DNA。

8.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于步驟一中所述PCR擴增所采用的檢測體系為25μL反應體系包括：2×Premix Ex Taq 12.5 μL，10μM 的上下游引物各0.5μL，模板溶液1μL，最后滅菌去離子水補足至25μL；所述PCR擴增所采用的擴增程序為：先95℃預變性10min，之后開始擴增循環，每個循環的程序為：95℃變性30s，59℃退火30s，72℃延伸30s，循環共35個；循環結束后，72℃延伸7min，降溫至10℃，結束。

9.權利要求1所述的引物或權利要求2-7所述的試劑盒在制備檢測雞白痢沙門氏菌試劑中的應用。

10.如權利要求9所述的應用，其特征在于所述的試劑用于區別雞白痢沙門氏菌與其他致病性沙門氏菌血清型以及大腸埃希氏菌，所述的其他致病性沙門氏菌血清型包括雞傷寒和腸炎沙門氏菌血清型。