[發明專利]一種包載bFGF的水凝膠釋放率的檢測方法

在審

• 申請號: 201710758407.4
• 申請日: 2017-08-29
• 公開（公告）號: CN107632146A
• 公開（公告）日: 2018-01-26
• 發明（設計）人: 張宏宇;顧志明;錢偉
• 申請（專利權）人: 蘇州榭睿迦醫療科技發展有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 上海恒銳佳知識產權代理事務所(普通合伙)31286
• 代理人: 章月溱

【技術領域】

本發明屬于醫用材料技術領域，特別是涉及一種包載bFGF的水凝膠釋放率的檢測方法。

【背景技術】

隨著“濕性愈合理論”的提出，創面敷料保持創面的濕潤環境變得尤為重要，尤其是慢性難愈合創面。因此一系列模擬細胞外基質的水凝膠類敷料越來越得到廣泛的重視，如具有生物相容性的殼聚糖水凝膠敷料，其良好的生物相容性有效促進了糖尿病小鼠創面的愈合。

為提高創面愈合率的，人們對水凝膠做出了大量的研究，來提高水凝膠的性能，bFGF能夠改善細胞生長的微環境，促進彈性纖維和膠原蛋白的合成，使肌膚富有彈性，使皮膚處于滑嫩的狀態。

bFGF與水凝膠的結合，是現在行業的趨勢，也是待攻克的技術難題，bFGF與水凝膠的結合的效果，直接決定了水凝膠的性能。

因此，有必要提供一種包載bFGF的水凝膠釋放率的檢測方法來確認bFGF與水凝膠的結合。

【發明內容】

本發明的主要目的在于提供一種包載bFGF的水凝膠釋放率的檢測方法，從而提高釋放率精準度。

本發明通過如下技術方案實現上述目的：一種包載bFGF的水凝膠釋放率的檢測方法，包括如下步驟：

a)對包載bFGF的水凝膠進行冷凍干燥，表面噴金處理；對包載bFGF的水凝膠浸泡于PBS緩沖溶液中；

b)使用ELISA試劑盒檢測上述包載bFGF的SBMA水凝膠上清中bFGF的含量；

c)通過ELISA蛋白溶液與稀釋劑配置多個ELISA蛋白標準品；

d)取反應板，在反應板中孔內加入ELISA蛋白標準品和包載bFGF的水凝膠溶液，重復混合；

e)反應板每個孔加入蒸餾水和第一抗體工作液，重復混合；

f)加入酶標抗體工作液，重復混合；

g)加入顯色底物工作液，重復混合；

h)加入終止液以終止反應；

i)用酶標儀進行吸光度檢測bFGF的含量；

通過步驟b)與步驟i)中含量共同確認bFGF的累積釋放量。bFGF的累積釋放量＝ELISA試劑盒檢測的檢測量+酶標儀檢測的吸光度檢測量。

步驟a)中，稱取包載bFGF的水凝膠，并浸泡于PBS緩沖溶液里，靜置，取定量的上清液，同時再補充等量的PBS，于低溫保存。

步驟c)中，取多個離心管，第一離心管加入ELISA蛋白稀釋液，第二至第八離心管均加入少于第一離心管量的ELISA蛋白稀釋液，在第一離心管中加入ELISA蛋白溶液，混勻，吸出一定量加入至第二離心管中，震蕩混勻后，再從第二離心管吸出等量的溶液，加入至第三離心管中。如此反復對半稀釋，最后從最后一個離心管中吸出等量溶液棄去，形成ELISA蛋白標準品。

與現有技術相比，本發明一種包載bFGF的水凝膠釋放率的檢測方法的有益效果在于：檢測方法較為簡單，方便操作，并且其檢測的精度高。

【具體實施方式】

本發明為一種包載bFGF的水凝膠釋放率的檢測方法，包括如下步驟：

a)對包載bFGF的水凝膠進行冷凍干燥，表面噴金處理；對包載bFGF的水凝膠浸泡于PBS緩沖溶液中；

b)使用ELISA試劑盒檢測上述包載bFGF的SBMA水凝膠上清中bFGF的含量；

c)通過ELISA蛋白溶液與稀釋劑配置多個ELISA蛋白標準品；

d)取反應板，在反應板中孔內加入ELISA蛋白標準品和包載bFGF的水凝膠溶液，重復混合；

e)反應板每個孔加入蒸餾水和第一抗體工作液，重復混合；

f)加入酶標抗體工作液，重復混合；

g)加入顯色底物工作液，重復混合；

h)加入終止液以終止反應；

i)用酶標儀進行吸光度檢測bFGF的含量；

通過步驟b)與步驟i)中含量共同確認bFGF的累積釋放量。

詳細檢測舉例說明如下：

提供SBMA水凝膠以及加入bFGF，液氮速凍5分鐘并通過真空低溫方式抽干，形成包載bFGF的水凝膠。再進行冷凍干燥24小時，表面噴金處理。

使用ELISA試劑盒檢測上述包載bFGF的SBMA水凝膠在各個時間段上清中bFGF的含量，(各個時間點可以為：3小時，9小時，24小時，第3天，第7天，第10天以及第20天)。