[發明專利]一種治療流感嗜血桿菌引起中耳炎的血清及該血清的應用

有效

• 申請號: 201710757260.7
• 申請日: 2017-08-29
• 公開（公告）號: CN107722120B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發明（設計）人: 孫愛華;嚴杰;范興麗;張新蔚
• 申請（專利權）人: 杭州醫學院
• 主分類號: C07K16/06
• 分類號: C07K16/06;C07K16/12;C12N15/70;A61K39/40;A61P27/16
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 沈淵琪

一種治療流感嗜血桿菌引起中耳炎的血清及該血清的應用，屬于生物技術領域。該血清由重組蛋白MAP?rHap?C4?GGGS?Hap?C150免疫得到。該血清（及血清稀釋液）具有有效殺菌功能。由于該血清除具有殺菌作用的抗體成份外其余成份與人體血清成份相似，如經無菌、生物安全處理，制成滴耳液用于中耳炎治療，則具有易于吸收，不使用激素，不會產生依賴性，適合嬰幼兒使用的優點。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種治療流感嗜血桿菌引起中耳炎的血清及該血清的應用。

背景技術

流感嗜血桿菌（Haemophilus influenzae，Hi）為寄生于人鼻咽部及上呼吸道的革蘭陰性小桿菌，呼吸道為主要入侵門戶，可引起全身多部位的感染。近年研究報道急性化膿性中耳炎（特別是12歲以下的兒童患者）中Hi檢出率大幅上升感染。流感嗜血桿菌可分為莢膜型和無莢膜型，前者可用莢膜抗體分為6個血清型，故莢膜型Hi又稱為可分型流感嗜血桿菌（typeable H. influenzae，THi）；后者無法用莢膜多糖抗體分型，故無莢膜型Hi又稱為不可分型流感嗜血桿菌（nontypeable H. influenzae，NTHi）。目前臨床報道70%~98%臨床分離株為NTHi。

阻止Hi黏附定植，減少細菌微菌落的形成是防治流感嗜血桿菌感染的關鍵，已有的研究顯示Hap蛋白不僅是位于流感嗜血桿菌外膜的黏附因子，NTHi和THi均有表達，同時還可誘導機體產生具有免疫保護作用的黏膜S-IgA和血清IgG，血清IgG能阻止NTHi在呼吸道的黏附定植, 減少細菌微菌落的形成，因此Hap 蛋白誘導機體產生的IgG很有希望成為治療流感嗜血桿菌感染的抑菌或殺菌制劑的成份。然而研究發現在流感嗜血桿菌生長過程中，Hap 表達量達到一定程度后，就會啟動自體解離，最終導致細菌的分散和在呼吸道內的傳播，因此普通的細菌培養不足以獲得足夠的Hap蛋白，要獲得大量Hap蛋白作為抗原制備抗體需進行生物學改造。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明的目的在于提供一種治療流感嗜血桿菌引起中耳炎的血清及該血清的應用的技術方案。

所述的一種治療流感嗜血桿菌引起中耳炎的血清，其特征在于由重組蛋白MAP-rHap-C4-GGGS-Hap-C150免疫得到。

所述的一種治療流感嗜血桿菌引起中耳炎的血清，其特征在于所述的MAP-rHap-C4-GGGS-Hap-C150通過以下步驟得到：

1）以流感嗜血桿菌基因組DNA為模板，采用連接引物 PCR 分別擴增帶柔性肽結構的hap-C4和hap-C150片段構建流感嗜血桿菌黏附Hap蛋白優勢表位融合基因hap-C4-GGGS-hap-C150；

2）以pUCm-T^{-hap-C4-GGGS-hap-C150}為模板，采用引物攜帶EK序列互補構建hap-C4-GGGS-hap-C150-EK串聯表位融合片段；以pUCm-T^{-8[hap-C4-GGGS-hap-C150-EK]}為模板，擴增獲得NdeI-8×[Hap-C4-GGGS- Hap-C150-EK]-XhoI片段；

3）以NdeI-8×[Hap-C4-GGGS-Hap-C150-EK]–XhoI構建原核表達系統EcoliBL21DE3^{pET42a-8×[Hap-C4-GGGS-Hap-C150-EK]}，原核表達系統Ecoli BL21DE3^{pET42a-8×[Hap-C4-GGGS-Hap-C150-EK]}誘導表達重組融合蛋白8×[rHap-C4-GGGS-Hap-C150-EK]，重組融合蛋白8×[rHap-C4-GGGS-Hap-C150-EK]水解提純得到rHap-C4-GGGS-Hap-C150融合表位肽；