[發明專利]一種治療流感嗜血桿菌引起中耳炎的血清及該血清的應用

有效

• 申請號: 201710757260.7
• 申請日: 2017-08-29
• 公開（公告）號: CN107722120B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發明（設計）人: 孫愛華;嚴杰;范興麗;張新蔚
• 申請（專利權）人: 杭州醫學院
• 主分類號: C07K16/06
• 分類號: C07K16/06;C07K16/12;C12N15/70;A61K39/40;A61P27/16
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 沈淵琪

1.一種治療流感嗜血桿菌引起中耳炎的血清，其特征在于由重組蛋白MAP-rhap-C4-GGGS-hap-C150免疫得到，具體通過以下步驟得到：

1）以不可分型流感嗜血桿菌標準菌株ATCC49247基因組DNA為模板，采用連接引物 PCR分別擴增帶柔性肽結構的hap-C4和hap-C150片段構建流感嗜血桿菌黏附hap蛋白優勢表位融合基因hap-C4-GGGS-hap-C150；連接引物hap-C4-1包括hap-C4-1F和hap-C4-1R，所述的hap-C4-1F的核苷酸序列如SEQ No.1所示，所述的hap-C4-1R的核苷酸序列如SEQ No.2所示，連接引物hap-C150-1包括hap-C150-1F和hap-C150-1R，所述的hap-C150-1F核苷酸序列如SEQ No.3所示，所述的hap-C150-1R核苷酸序列如SEQ No.4所示；

2）以pUCm-T^{-hap-C4-GGGS-hap-C150}為模板，hap-C4-2F和hap-C150-2R為引物，引物hap-C4-2F的核苷酸序列如SEQ No.5所示，引物hap-C150-2R的核苷酸序列如SEQ No.6所示，用引物攜帶EK序列互補構建hap-C4-GGGS-hap-C150-EK串聯表位融合片段；以pUCm-T^{-8[hap-C4-GGGS-hap-C150-EK]}為模板，hap-C4-3F和hap-C150-3R為引物，引物hap-C4-3F的核苷酸序列如SEQ No.7所示，引物hap-C150-3R的核苷酸序列如SEQ No.8所示，擴增獲得NdeI-8×[hap-C4-GGGS- hap-C150-EK]-XhoI片段；

3）以NdeI-8×[hap-C4-GGGS-hap-C150-EK]–XhoI構建原核表達系統EcoliBL21DE3^{pET42a-8×[hap-C4-GGGS-hap-C150-EK]}，原核表達系統Ecoli BL21DE3^{pET42a-8×[hap-C4-GGGS-hap-C150-EK]}誘導表達重組融合蛋白8×[rhap-C4-GGGS-hap-C150-EK]，重組融合蛋白8×[rhap-C4-GGGS-hap-C150-EK]水解提純得到rhap-C4-GGGS-hap-C150融合表位肽；

4）用碳二亞胺法將rhap-C4-GGGS-hap-C150與Poly-Asp-Lys載體大分子交聯，制備出多抗原MAP交聯肽MAP-rhap-C4-GGGS-hap-C150。

2.如權利要求1所述的血清在制備治療流感嗜血桿菌引起中耳炎藥物中的應用。