[發明專利]一種觀察月季黑斑病侵染過程的石蠟切片染色方法

有效

• 申請號: 201710756558.6
• 申請日: 2017-08-29
• 公開（公告）號: CN107576552B
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 潘會堂;徐庭亮;張啟翔;程堂仁;王佳
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30;G01N1/28
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

1.一種觀察月季黑斑病侵染過程的石蠟切片染色方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）切片脫蠟至水后，將切片置于1%的結晶紫水溶液中染色5~10min；

2）用蒸餾水沖去染色后的切片表面的結晶紫；

3）用碘液處理沖洗后的切片30~40s，進行媒染；

4）用95%酒精清洗媒染后的切片15~60s，進行脫色；

5）用無水乙醇脫水5~10s。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2）中的具體操作為用蒸餾水快速沖洗載玻片兩次，每次5s。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步驟3)中的媒染時間為30s。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1）中將切片脫蠟至水后，將切片置于1%的結晶紫水溶液中染色5min；

和/或所述步驟4）中用95%酒精快速清洗媒染后的切片60s，清洗2次。

5.根據權利要求1、2或4任一項所述的方法，其特征在于，所述1%的結晶紫水溶液由如下方法制備得到，將1g 的結晶紫溶于100ml蒸餾水中，充分溶解后，于濾紙中進行過濾，即得；

和/或，所述碘液由如下方法制備得到，取碘和碘化鉀各1g 溶于100ml 80% 酒精中，充分溶解，即得。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述1%的結晶紫水溶液由如下方法制備得到，將1g 的結晶紫溶于100ml蒸餾水中，充分溶解后，于濾紙中進行過濾，即得；

和/或，所述碘液由如下方法制備得到，取碘和碘化鉀各1g 溶于100ml 80% 酒精中，充分溶解，即得。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）切片脫蠟至水后，將切片置于1%的新鮮配制的過濾后的結晶紫水溶液中染色5min；

2）用蒸餾水快速沖洗染色后的切片5s，沖洗2次；

3）用碘液處理沖洗后的切片30s，進行媒染；

4）用95%酒精快速清洗媒染后的切片60s，清洗2次；

5）用無水乙醇脫水5~10s。

8.一種觀察月季黑斑病侵染過程的石蠟切片的制備方法，其特征在于，將樣品進行固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與展片、脫蠟、染色以及封片處理，所述染色采用權利要求1~7任一項所述的方法進行，所述封片的操作為：

將脫水完畢后的切片在光學顯微鏡下用透明液進行透明，當觀察到真菌和寄主組織顯示清楚時，用二甲苯進行處理，進行封片。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述透明液由丁子香油、無水乙醇和二甲苯按體積比50：25：25配制而成。

10.權利要求9所述方法制備得到的石蠟切片。