[發明專利]定量檢測胃泌素釋放肽前體(pro?GRP)的雙光子熒光免疫層析試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201710755769.8
• 申請日: 2017-08-31
• 公開（公告）號: CN107389928A
• 公開（公告）日: 2017-11-24
• 發明（設計）人: 李道鋒;張鐵漢;段德民;潘文東
• 申請（專利權）人: 重慶康巨全弘生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/533
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技術領域

本發明涉及醫學檢驗領域中的癌癥臨床免疫診斷試劑盒領域，具體涉及定量檢測胃泌素釋放肽前體(pro-GRP)的雙光子熒光免疫層析試劑盒。

背景技術

Pro-GRP是胃泌素釋放肽(GRP)的前體結構。而GRP和Pro-GRP在腫瘤的發生、發展及其治療中起著重要的作用。Pro-GRP顯示GRP水平和GRP基因表達，是SCLC的一種新的腫瘤標志物，在國內外已經得到廣泛應用。由于SCLC具有神經內分泌腫瘤的性質，因此，Pro-GRP和NSE在SCLC的診斷中具有良好的診斷價值。

有研究比較了健康者、肺部良性疾病患者、NSCLC患者、SCLC患者血清中Pro-GRP和NSE水平的差異，分析兩者在SCLC診斷方面的應用，同時初步探討了Pro-GRP水平與患者復發轉移的關系。SCLC患者Pro-GRP和NSE的水平均明顯高于健康對照組、良性疾病組和NSCLC組(P＝0.00)。Pro-GRP和NSE診斷SCLC的敏感度分別為84.17％與65.00％，特異度分別為92.00％與85.33％，說明Pro-GRP和NSE均可作為診斷SCLC的指標之一。兩者聯合檢測對SCLC的診斷敏感度可達93.33％，特異度達84.00％，表明兩者在SCLC診斷中具有一定的互補性，可提高其敏感度。有研究證明，Pro-GRP在臨床確診SCLC復發前35d就已開始升高，而NSE則在臨床確診SCLC復發20d后才開始升高，提示Pro-GRP是一個可較早預測SCLC復發的敏感指標。本研究結果也發現，Pro-GRP在臨床確診SCLC復發轉移前30d就開始升高，而且Pro-GRP水平高于臨界值5倍的患者更易發生復發轉移(r＝0.78，P＝0.01)，表明Pro-GRP高于臨界值5倍的血清學水平與SCLC患者復發轉移呈顯著相關性。總之，Pro-GRP更適用于SCLC的早期診斷、預測SCLC患者的復發轉移以及與NSCLC的鑒別診

申請號為CN201510474660.8的中國發明專利申請公開了一種胃泌素釋放肽前體(Pro-GRP)快速診斷試劑盒的制備方法，主要基于微量滴定板(如96孔板、384孔板)進行分析，靈敏度高，但是操作復雜，反應時間長，成本高。而且如果樣本量比較少，則需要等待，從而無法滿足基層醫院，包括縣級及鄉鎮醫院以及診所的需求。

發明內容

本發明的目的是針對上述現有技術中存在的不足，提供一種基層醫院到三甲醫院均適用的、靈敏度高、準確性強、操作簡便、能夠快速診斷小細胞肺癌的診斷試劑盒。

為解決上述技術問題，本發明采用雙光子熒光免疫層析技術，以胃泌素釋放肽前體(pro-GRP)作為檢測指標，具體的技術方案為：

本發明的一個方面提供了一種定量檢測胃泌素釋放肽前體(pro-GRP)的雙光子熒光免疫層析試劑盒，包括扣卡(11)、雙光子熒光免疫層析試紙條和緩沖液，其中，扣卡(11)為熒光免疫層析試紙條的外部殼結構，包括加樣孔(9)和觀察窗(10)，如圖3所示。

熒光免疫層析試紙條結構如圖1和圖2所示，包括樣品墊(1)、標記墊(2)、層析膜(6)、吸水墊(7)和底板(8)。當進行全血樣品檢測時，試紙條還包括血液分離膜(3)。其中，樣品墊(1)、標記墊(2)、血液分離膜(3)、層析膜(6)和吸水墊(7)搭載于底板(8)之上，樣品墊(1)位于加樣孔(9)的下方，且連接于標記墊(2)，標記墊(2)連接于層析膜(6)，層析膜(6)連接于吸水墊(7)，其上固定有一條定量檢測線(4)和一條質控線(5)，優選二者距離3mm～8mm，并位于觀察窗(10)的下方。在包括血液分離膜(3)的情況下，血液分離膜(3)設置在標記墊(2)和層析膜(6)之間，此時標記墊(2)連接于血液分離膜(3)，血液分離膜(3)連接于層析膜(6)，或者血液分離膜(3)設置在樣品墊(1)和標記墊(2)之間，此時樣品墊(1)連接于血液分離膜(3)，血液分離膜(3)連接于標記墊(2)，或者血液分離膜(3)直接與樣品墊(1)合并為同一結構。

標記墊(2)上同時固定有熒光染料修飾的胃泌素釋放肽前體(pro-GRP)特異性抗體，和熒光染料修飾的質控分子，修飾胃泌素釋放肽前體(pro-GRP)特異性抗體的熒光染料的發射波長與修飾質控分子的熒光染料的發射波長相同，波長范圍為300-500nm。

定量檢測線(4)上固定有熒光染料標記的胃泌素釋放肽前體(pro-GRP)特異性抗體，該特異性抗體所識別的抗原決定簇與固定在標記墊(2)上的熒光染料修飾的胃泌素釋放肽前體(pro-GRP)特異性抗體所識別的抗原決定簇不同。