[發明專利]定量檢測胃泌素釋放肽前體(pro?GRP)的雙光子熒光免疫層析試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201710755769.8
• 申請日: 2017-08-31
• 公開（公告）號: CN107389928A
• 公開（公告）日: 2017-11-24
• 發明（設計）人: 李道鋒;張鐵漢;段德民;潘文東
• 申請（專利權）人: 重慶康巨全弘生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/533
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種定量檢測胃泌素釋放肽前體(pro-GRP)的雙光子熒光免疫層析試劑盒，包括扣卡(11)、熒光免疫層析試紙條和Wash緩沖液，其特征在于：

扣卡(11)為熒光免疫層析試紙條的外部殼結構，包括加樣孔(9)和觀察窗(10)；

熒光免疫層析試紙條包括樣品墊(1)、標記墊(2)、層析膜(6)、吸水墊(7)和底板(8)，樣品墊(1)、標記墊(2)、層析膜(6)和吸水墊(7)搭載于底板(8)之上，樣品墊(1)位于加樣孔(9)的下方，且連接于標記墊(2)，標記墊(2)連接于層析膜(6)，層析膜(6)連接于吸水墊(7)，層析膜(6)上固定有一條定量檢測線(4)和一條質控線(5)，檢測線(4)和質控線(5)位于觀察窗(10)的下方；

標記墊(2)上同時固定有熒光染料修飾的胃泌素釋放肽前體(pro-GRP)胃泌素釋放肽前體(pro-GRP)特異性抗體，和熒光染料修飾的質控分子，修飾胃泌素釋放肽前體(pro-GRP)胃泌素釋放肽前體(pro-GRP)特異性抗體的熒光染料的發射波長與修飾質控分子的熒光染料的發射波長相同，波長范圍為300-500nm；

定量檢測線(4)上固定有胃泌素釋放肽前體(pro-GRP)胃泌素釋放肽前體(pro-GRP)特異性抗體，該特異性抗體所識別的抗原決定簇與固定在標記墊(2)上的熒光染料修飾的胃泌素釋放肽前體(pro-GRP)胃泌素釋放肽前體(pro-GRP)特異性抗體所識別的抗原決定簇不同；以及質控線(5)上固定有能與質控分子特異性結合的熒光染料修飾生物分子。修飾包被胃泌素釋放肽前體(pro-GRP)特異性抗體的熒光染料的發射波長與修飾質控分子的熒光染料的發射波長相同，波長范圍為500-800nm；

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述熒光免疫層析試紙條還包括血液分離膜(3)，其設置在標記墊(2)和層析膜(6)之間，此時標記墊(2)連接于血液分離膜(3)，血液分離膜(3)連接于層析膜(6)；或者設置在樣品墊(1)和標記墊(2)之間，此時樣品墊(1)連接于血液分離膜(3)，血液分離膜(3)連接于標記墊(2)；或者直接與樣品墊(1)合并為同一結構。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述標記熒光染料為有機熒光染料、稀土元素熒光染料、熒光微球或者量子點熒光染料，發射波長為300-500nm，本例選365nm。熒光染料為有機熒光染料、稀土元素熒光染料或者量子點熒光染料，發射波長為500-800nm，本例選635nm；且標記和包被熒光染料可以互換。所述的其中一個染料為稀土元素熒光染料、熒光微球或者量子點熒光染料；所述另外一個染料是機熒光染料為Alexa系列近紅外熒光化合物、DyLight系列近紅外熒光化合物和CF系列近紅外熒光化合物中的至少一種；其特征在于，所述近有機熒光染料為Alexa Fluro系列(Alexa Fluro647、610、633、700、750)的熒光素、DyLight系列、(DyLight649、633、549、680)、CF647中的至少一種等。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述層析膜、底板和扣卡在大于550nm時熒光很弱或不含有熒光劑，優選底板為白色，表面附有不干膠，且兩者均不含熒光劑。

5.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述Wash緩沖液包含牛血清白蛋白、蔗糖和表面活性劑，pH值為7.0-8.0，其中，牛血清白蛋白的濃度為0.05～2％，蔗糖的濃度為1～15％，表面活性劑的濃度為0.05～2％。