[發明專利]南方紅豆杉愈傷組織誘導方法

在審

• 申請號: 201710754583.0
• 申請日: 2017-08-29
• 公開（公告）號: CN107372117A
• 公開（公告）日: 2017-11-24
• 發明（設計）人: 朱波風
• 申請（專利權）人: 江蘇紅豆杉生物科技股份有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙)32104
• 代理人: 曹祖良,劉海

技術領域

本發明涉及一種南方紅豆杉愈傷組織誘導方法，屬于植物種植技術領域。

背景技術

紅豆杉屬于裸子植物，主要分布于我國的云南、四川、西藏和東北，是一類具有重要開發價值的樹木，它產生的紫杉醇通過臨床實驗被認為是廣譜的抗癌藥物。自然狀態下，紫杉醇的含量極低，僅占樹皮干重的十萬分之一，靠自然資源解決這一問題十分困難。近年來，通過人們的不斷努力，篩選出了一批含量較高的單株，雖然可以通過播種育苗和扦插繁殖進行規模生產，但短期內無法獲得足夠的種子和枝條，因此利用植物組織培養的多次繼代性，可以在短時間內獲得生產所需要的植物原料，有效解決紫杉醇生產藥源的問題。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術中存在的不足，提供一種南方紅豆杉愈傷組織誘導方法，能夠快速繁育大量的愈傷組織，為南方紅豆杉育苗提供充足的資源，有效解決紫杉醇生產藥源的問題。

按照本發明提供的技術方案，所述南方紅豆杉愈傷組織誘導方法，其特征是：，包括以下步驟：

（1）材料選擇：選擇當年生的南方紅豆杉嫩枝；

（2）愈傷組織誘導用培養基：

愈傷組織誘導用培養基的基本成分采用B5培養基的微量元素、有機物和鐵鹽，每升愈傷組織誘導用培養基中加入蔗糖25～30g、植物凝膠2～2.5g、生長素NAA 1mg、2,4-D 1mg、細胞分裂素KT 0.1mg，酸堿度調節至5.6～5.8，配置好的培養基用培養瓶分裝，經高溫、高壓滅菌后備用；

（3）材料消毒：對步驟（1）所述的南方紅豆杉嫩枝進行消毒處理；

（4）接種：

將南方紅豆杉嫩枝取出，用無菌濾紙吸去南方紅豆杉嫩枝表面的水分，將南方紅豆杉嫩枝切成小段，并切取部分針葉，嫩枝切段用作外植體，接種在愈傷組織誘導用培養基上，接種時要讓嫩枝的植物學近地端接觸培養基；

（5）愈傷組織誘導：

將步驟（4）中接種好的愈傷組織誘導用培養基放置于培養室中培養，溫度25±2℃，光照強度1500～2000lx，光照時間10～12h/d；紅豆杉嫩枝和針葉在培養基上2-3周后即開始形成愈傷組織，約4-5周愈傷組織直徑可達1-2cm。

進一步的，所述步驟（1）中南方紅豆杉嫩枝的取材時間為每年的7-8月。

進一步的，所述步驟（3）中材料消毒的具體過程為：將南方紅豆杉嫩枝放入加有含有洗潔精的自來水中浸泡10～15分鐘，洗潔精的重量百分濃度為0.01～0.02%，浸泡過程中保持攪動，浸泡結束后用自來水沖洗10分鐘以上；再將南方紅豆杉嫩枝轉入一干凈的容器中，隨后轉入超凈工作臺上進行無菌操作；首先往容器中加入濃度為70～75%的酒精，加入量為嫩枝體積的10倍以上，浸泡殺菌30～60秒，倒掉酒精，用無菌蒸餾水漂洗一次；再將南方紅豆杉嫩枝轉入已高壓消毒的容器中，加入嫩枝體積10～15倍的升汞溶液，升汞溶液的濃度為0.1～0.15%，浸泡殺菌5～8分鐘，浸泡過程中保持搖動，以使升汞溶液與南方紅豆杉嫩枝充分接觸；倒掉升汞溶液，用無菌蒸餾水沖洗4～6次，每次1～2分鐘，以徹底除去升汞。

進一步的，所述步驟（4）中，南方紅豆杉嫩枝切成0.5～0.8cm的小段。

本發明所述的南方紅豆杉愈傷組織誘導方法，采用的愈傷組織誘導用培養基中添加的成分能夠快速繁育大量的愈傷組織，4-5周后愈傷組織誘導率即達到90%以上，從而為南方紅豆杉育苗提供充足的資源，有效解決紫杉醇生產藥源的問題。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明作進一步說明。

實施例一：一種南方紅豆杉愈傷組織誘導方法，包括以下步驟：

（1）材料選擇：

較為適宜的組培外植體為當年生的南方紅豆杉嫩枝，取材時間為每年的7-8月；

（2）愈傷組織誘導用培養基：

愈傷組織誘導用培養基的基本成分采用B5培養基的微量元素、有機物和鐵鹽，每升愈傷組織誘導用培養基中加入蔗糖25g、植物凝膠2g、生長素NAA 1mg、2,4-D 1mg、細胞分裂素KT 0.1mg，酸堿度調節至5.6，配置好的培養基用培養瓶分裝，經高溫、高壓滅菌后備用；

（3）材料消毒：