[發明專利]南方紅豆杉愈傷組織誘導方法

在審

• 申請號: 201710754583.0
• 申請日: 2017-08-29
• 公開（公告）號: CN107372117A
• 公開（公告）日: 2017-11-24
• 發明（設計）人: 朱波風
• 申請（專利權）人: 江蘇紅豆杉生物科技股份有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙)32104
• 代理人: 曹祖良,劉海

1.一種南方紅豆杉愈傷組織誘導方法，其特征是：，包括以下步驟：

（1）材料選擇：選擇當年生的南方紅豆杉嫩枝；

（2）愈傷組織誘導用培養基：

愈傷組織誘導用培養基的基本成分采用B5培養基的微量元素、有機物和鐵鹽，每升愈傷組織誘導用培養基中加入蔗糖25～30g、植物凝膠2～2.5g、生長素NAA 1mg、2,4-D 1mg、細胞分裂素KT 0.1mg，酸堿度調節至5.6～5.8，配置好的培養基用培養瓶分裝，經高溫、高壓滅菌后備用；

（3）材料消毒：對步驟（1）所述的南方紅豆杉嫩枝進行消毒處理；

（4）接種：

將南方紅豆杉嫩枝取出，用無菌濾紙吸去南方紅豆杉嫩枝表面的水分，將南方紅豆杉嫩枝切成小段，并切取部分針葉，嫩枝切段用作外植體，接種在愈傷組織誘導用培養基上，接種時要讓嫩枝的植物學近地端接觸培養基；

（5）愈傷組織誘導：

將步驟（4）中接種好的愈傷組織誘導用培養基放置于培養室中培養，溫度25±2℃，光照強度1500～2000lx，光照時間10～12h/d；紅豆杉嫩枝和針葉在培養基上2-3周后即開始形成愈傷組織，約4-5周愈傷組織直徑可達1-2cm。

2.如權利要求1所述的南方紅豆杉愈傷組織誘導方法，其特征是：所述步驟（1）中南方紅豆杉嫩枝的取材時間為每年的7-8月。

3.如權利要求1所述的南方紅豆杉愈傷組織誘導方法，其特征是：所述步驟（3）中材料消毒的具體過程為：將南方紅豆杉嫩枝放入加有含有洗潔精的自來水中浸泡10～15分鐘，洗潔精的重量百分濃度為0.01～0.02%，浸泡過程中保持攪動，浸泡結束后用自來水沖洗10分鐘以上；再將南方紅豆杉嫩枝轉入一干凈的容器中，隨后轉入超凈工作臺上進行無菌操作；首先往容器中加入濃度為70～75%的酒精，加入量為嫩枝體積的10倍以上，浸泡殺菌30～60秒，倒掉酒精，用無菌蒸餾水漂洗一次；再將南方紅豆杉嫩枝轉入已高壓消毒的容器中，加入嫩枝體積10～15倍的升汞溶液，升汞溶液的濃度為0.1～0.15%，浸泡殺菌5～8分鐘，浸泡過程中保持搖動，以使升汞溶液與南方紅豆杉嫩枝充分接觸；倒掉升汞溶液，用無菌蒸餾水沖洗4～6次，每次1～2分鐘，以徹底除去升汞。

4.如權利要求1所述的南方紅豆杉愈傷組織誘導方法，其特征是：所述步驟（4）中，南方紅豆杉嫩枝切成0.5～0.8cm的小段。