[發(fā)明專利]一種利用秀麗隱桿線蟲(chóng)篩選抗泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌藥物的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710754277.7
• 申請(qǐng)日: 2017-08-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107751089B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姜志輝;李健;段欣冉;何羨霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院
• 主分類號(hào): A01K67/02
• 分類號(hào): A01K67/02;A61K49/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛(wèi)

本發(fā)明公開(kāi)了一種利用秀麗隱桿線蟲(chóng)篩選抗泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌藥物的方法。首先構(gòu)建用于篩選組合物藥效的秀麗隱桿線蟲(chóng)?泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌感染模型，所述秀麗隱桿線蟲(chóng)具有glp?4;sek?1雙基因突變；秀麗隱桿線蟲(chóng)?泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌共培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成為20%BHI+5～20μM萘啶酸+5～20μg/ml FeCl₃；泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌濃度為1×10⁶～1×10⁹CFU/mL；細(xì)菌感染秀麗隱桿線蟲(chóng)的時(shí)長(zhǎng)為6～12h；藥物治療感染模型的時(shí)長(zhǎng)為24～48h。所述模型可用于快速高通量篩選各類化合物或藥物或組合物的體內(nèi)抗菌活性，相比體內(nèi)動(dòng)物感染模型，具有制備成本低，周期短，操作簡(jiǎn)易的巨大優(yōu)點(diǎn)。相比體外模型，可以篩選排除體內(nèi)毒性大，代謝差和體內(nèi)外相關(guān)性低的化合物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，涉及一種利用秀麗隱桿線蟲(chóng)篩選抗泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌藥物的方法。

背景技術(shù)

鮑曼不動(dòng)桿菌（Acinetobacter baumannii）是一類非發(fā)酵型革蘭陰性桿菌，廣泛存在于自然界和醫(yī)院環(huán)境中，是引起院內(nèi)感染最常見(jiàn)的條件致病菌之一。鮑曼不動(dòng)桿菌可引起包括呼吸道感染、泌尿系統(tǒng)感染、呼吸道感染、菌血癥、傷口感染、腦膜炎和呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎等在內(nèi)的多種感染性疾病，隨著抗菌藥物在臨床中的廣泛使用，該菌對(duì)常用抗生素產(chǎn)生了極大的耐藥性，甚至出現(xiàn)了多重耐藥（對(duì)常用抗菌藥物主要分類的3類或以上耐藥）的鮑曼不動(dòng)桿菌（MDR-AB）和廣泛耐藥（革蘭氏陰性桿菌僅對(duì)多粘菌素和替加環(huán)素敏感）的鮑曼不動(dòng)桿菌（XDR-AB），給臨床治療帶來(lái)極大的挑戰(zhàn)。

鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥性是通過(guò)多種耐藥機(jī)制介導(dǎo)的，其中細(xì)菌主動(dòng)外排泵的過(guò)度表達(dá)可使抗菌藥物不能在細(xì)胞內(nèi)蓄積達(dá)到作用濃度，是耐藥性產(chǎn)生的一個(gè)重要途徑。在不動(dòng)桿菌屬中，耐藥結(jié)節(jié)分化（resistance-nodulation-division，RND）家族對(duì)細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生有重要作用，其中AdeABC、AdeIJK、AdeFGH外排系統(tǒng)主要存在于鮑曼不動(dòng)桿菌，可外排多種抗菌藥物如喹諾酮類、氨基糖苷類、四環(huán)素、紅霉素等引起耐藥。喹諾酮類藥物如環(huán)丙沙星，曾作為治療鮑曼不動(dòng)桿菌感染的一線抗菌藥物，但由于鮑曼對(duì)其產(chǎn)生了廣泛的耐藥性而導(dǎo)致臨床已基本摒棄環(huán)丙沙星用于治療耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌。研究發(fā)現(xiàn)，鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)環(huán)丙沙星的耐藥機(jī)制主要是外排泵的過(guò)度表達(dá)，將環(huán)丙沙星合用外排泵抑制劑（effluxpump inhibitors，EPIs）使其重新對(duì)耐藥菌株發(fā)揮作用，已成為治療鮑曼不動(dòng)桿菌感染的潛在有效途徑。

目前關(guān)于EPIs的研究多局限于體外實(shí)驗(yàn)，不同的EPIs在體內(nèi)能否逆轉(zhuǎn)鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥性達(dá)到較好的抑菌效果，是否會(huì)產(chǎn)生較大的毒性影響使用是目前EPIs應(yīng)用的主要問(wèn)題，亟待通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究解決。線蟲(chóng)能夠提供相對(duì)完整的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，又可避免小鼠模型的高價(jià)、耗時(shí)的缺點(diǎn)，因此可大幅降低藥物篩選的成本，是用于大規(guī)模藥物篩選的理想系統(tǒng)，近年來(lái)越來(lái)越多地受到科學(xué)家們的青睞。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)中抗泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌藥物及外排泵抑制劑研究存在的缺陷和不足，通過(guò)建立秀麗隱桿線蟲(chóng)-泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌感染模型，將環(huán)丙沙星聯(lián)合多種外排泵抑制劑應(yīng)用于此體內(nèi)感染模型中，篩選對(duì)泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌有效的組合藥物，為泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的臨床治療提供新的方法和思路。

本發(fā)明的目的是提供一種用于藥物篩選的秀麗隱桿線蟲(chóng)-泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌感染模型。

本發(fā)明的另一目的是提供利用所述模型篩選抗泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌藥物的方法。

本發(fā)明的上述目的是通過(guò)以下技術(shù)方案給予實(shí)現(xiàn)的：