[發明專利]一種人PD-L1蛋白Y123位點磷酸化抗體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710740882.9
• 申請日: 2017-08-24
• 公開（公告）號: CN107298697B
• 公開（公告）日: 2019-05-24
• 發明（設計）人: 張灝
• 申請（專利權）人: 張灝
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K16/28;C07K16/06;G01N33/574;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 宋靜娜;郝傳鑫

本發明公開了一種人PD?L1蛋白Y₁₂₃位點磷酸化抗體及其制備方法和應用，屬于抗體制備的生物醫學技術領域，人PD?L1蛋白Y₁₂₃位點磷酸化抗體的制備方法為：半抗原合成肽通過半胱氨酸C與載體蛋白進行偶聯，即得抗原；利用步驟1)抗原對動物進行免疫，并收集抗血清；將步驟2)抗血清進行純化和選擇，即為PD?L1蛋白Y₁₂₃位點磷酸化抗體；所述半抗原合成肽的氨基酸序列為CSYGGADYKRITVK，所述半抗原合成肽的酪氨酸Y位點添加有磷酸基團。本發明的人PD?L1蛋白Y₁₂₃位點磷酸化抗體能運用于惡性腫瘤診斷、治療及預后判定中。

技術領域

本發明屬于抗體制備的生物醫學技術領域，尤其涉及一種人PD-L1蛋白Y₁₂₃位點磷酸化抗體及其制備方法和應用。

背景技術

據2016年全球癌癥統計，全球全年約有1.5千萬癌癥新發病例，820萬患者死于癌癥；其中，57％癌癥患者以及65％癌癥死亡患者來自于發展中國家。腫瘤的發生、發展是個十分復雜的過程，T細胞在機體的抗腫瘤免疫系統中起著至關重要的作用。為了逃避機體免疫系統的監視，腫瘤細胞在腫瘤微環境中通過各種機制上調程序性細胞死亡配體1(programmed cell death lagand 1，PD-L1，也稱為B7-H1)的表達，PD-L1與T細胞表面的負性免疫檢查點-程序性細胞死亡受體1(PD-1，也稱為CD279)結合，T細胞功能被抑制，不能向免疫系統發出攻擊腫瘤的信號。PD-1/PD-L1抑制劑可以阻斷PD-1與PD-L1的結合，阻斷負向調控信號，使T細胞恢復活性，從而增強免疫應答。

PD-L1選擇性地高表達于腫瘤組織。PD-L1是一個由290個氨基酸組成的跨膜糖蛋白，屬于B7-CD28超家族成員，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。目前研究顯示，PD-L1的mRNA廣泛轉錄于正常人類組織和器官，其中，胎盤、心臟、肺臟和肝臟中高轉錄，脾臟、淋巴結、胸腺中低轉錄，中樞神經系統中不轉錄。然而，相應的PD-L1蛋白卻沒有廣泛翻譯于正常組織中，僅少量翻譯于扁桃體、肺臟、肝臟的巨噬細胞樣細胞和免疫特許區域，PD-L1蛋白也在眼睛和胎盤中翻譯。PD-L1在mRNA水平上的轉錄和細胞膜蛋白水平上的翻譯存在差異，這暗示著一種重要的機制調控PD-L1蛋白的表達。近年來，通過免疫組織化學法(IHC)檢測手術或活檢標本，發現PD-L1蛋白在黑色素瘤、乳腺癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、腎癌等多種腫瘤中高表達，而在正常組織中低表達或不表達。PD-L1蛋白低表達于正常組織中而誘導性地高表達于腫瘤組織是其區別于其他共抑制性信號通路最顯著的特點，這暗示著PD-L1蛋白有選擇性地表達于腫瘤組織中，與腫瘤微環境密切相關。這些發現為腫瘤免疫治療提供了重要的靶點，以期取得更好的療效及更低的毒副作用。

隨著精準醫療概念的提出，有關免疫治療的研究得到越來越多的關注。PD-1/ PD-L1免疫療法是當前備受矚目的一類抗癌免疫療法，旨在利用人體自身的免疫系統抵御腫瘤：其通過阻斷PD-1/PD-L1信號通路使腫瘤細胞死亡，適用于多種類型腫瘤。各研究機構逐步開展相應的臨床項目，調查單藥療法和聯合療法治療癌癥的效果，以期發掘該類藥物的臨床價值。目前，opdivo在日本已適用于黑色素瘤，在美國適用于黑色素瘤和非小細胞肺癌，在歐盟獲批黑色素瘤適應證，同時opdivo用于肺癌治療的申請已獲得歐盟CHMP的支持。默沙東公司 keytruda在美國已獲批黑色素瘤適應證，并有望近期通過非小細胞肺癌適應證批準，同時keytruda用于黑色素瘤治療的申請已獲得歐盟CHMP支持。然而，阿斯利康公司的MEDI4736和羅氏公司的RG7446目前尚未收獲任何適應證。全球知名醫藥市場調研機構evaluatepharma預測：opdivo將成為最成功的免疫療法藥物制劑中的一種。

目前針對PD-1/PD-L1的研究比較集中，但是缺少新靶點的開發，“免疫治療”治療模式還不夠規范。雖然PD-1抑制劑與靶向藥(針對癌癥細胞)有著根本的不同，但耐藥問題依然存在，有必要進一步研究和開發新靶點。