[發明專利]一種人PD-L1蛋白Y123位點磷酸化抗體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710740882.9
• 申請日: 2017-08-24
• 公開（公告）號: CN107298697B
• 公開（公告）日: 2019-05-24
• 發明（設計）人: 張灝
• 申請（專利權）人: 張灝
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K16/28;C07K16/06;G01N33/574;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 宋靜娜;郝傳鑫

1.一種人PD-L1蛋白Y₁₂₃位點磷酸化抗體的半抗原合成肽，其特征在于：所述半抗原合成肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述半抗原合成肽靠近C端的酪氨酸Y位點添加有磷酸基團。

2.如權利要求1所述半抗原合成肽的合成方法，其特征在于：依次包括以下步驟：采用多肽合成技術合成多肽，所述多肽的氨基酸序列為SYGGADYKRITVK，所述多肽靠近C端的酪氨酸Y位點添加磷酸基團，所述多肽的N末端連接一個半胱氨酸C。

3.一種人PD-L1蛋白Y₁₂₃位點磷酸化抗體的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)將權利要求1所述的半抗原合成肽通過半胱氨酸C與載體蛋白進行偶聯，即得抗原；

2)利用步驟1)所述抗原對動物進行免疫，并收集抗血清；

3)將步驟2)所述抗血清進行純化和選擇，即為PD-L1蛋白Y₁₂₃位點磷酸化抗體。

4.如權利要求3所述人PD-L1蛋白Y₁₂₃位點磷酸化抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟2)免疫方式具體為：1次引發注射，3～4次加強注射和1次直接注射；所述引發注射和加強注射均為：將抗原合成肽與佐劑聯合免疫動物，在頸部、背部兩側皮下注射，臀肌與大腿部兩側分別肌肉注射，腰部兩側皮內注射，爪墊注射；所述直接注射為：抗原溶液肌肉注射。

5.如權利要求3所述人PD-L1蛋白Y₁₂₃位點磷酸化抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟3)中，純化通過以下步驟實施：測定純化前的抗血清針對抗原的效價，確定純化前的抗血清能識別抗原；對收集的抗血清進行純化，確定純化后的抗血清能特異性識別磷酸化人PD-L1蛋白。