[發明專利]一種cik免疫細胞的體外誘導擴增方法在審
| 申請號: | 201710739714.8 | 申請日: | 2017-08-25 |
| 公開(公告)號: | CN107418933A | 公開(公告)日: | 2017-12-01 |
| 發明(設計)人: | 朱學義;徐峰波;陳樂;王豪東;陳艷普;王秋文 | 申請(專利權)人: | 河南省銀豐生物工程技術有限公司 |
| 主分類號: | C12N5/0783 | 分類號: | C12N5/0783 |
| 代理公司: | 南京源古知識產權代理事務所(普通合伙)32300 | 代理人: | 馬曉輝 |
| 地址: | 450000 河南省鄭*** | 國省代碼: | 河南;41 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 cik 免疫 細胞 體外 誘導 擴增 方法 | ||
1.一種cik免疫細胞的體外誘導擴增方法,其特征在于:包括以下步驟:
(1)將純化的CD3單克隆抗體溶液室溫下包被細胞培養板,并于4℃存儲備用;
(2)將分離得到的單個核細胞以基礎培養基培養,接種于細胞培養板中,通過γ-干擾素溶液刺激細胞24h,之后經離心、換液,轉移至步驟(1)得到的CD3單克隆抗體包被的細胞培養板中培養,每隔2-3d換培養液,并每隔5-10天懸浮刺激細胞,培養至20-25d時,結束培養。
2.根據權利要求1所述的cik免疫細胞的體外誘導擴增方法,其特征在于:所述步驟(1)中,包被的細胞培養板在使用之前,需吸出孔內的CD3單克隆抗體溶液,并用D-Hanks緩沖液沖洗細胞培養板。
3.根據權利要求1所述的cik免疫細胞的體外誘導擴增方法,其特征在于:所述步驟(2)中,基礎培養基為PRMI-1640培養基。
4.根據權利要求1所述的cik免疫細胞的體外誘導擴增方法,其特征在于:所述步驟(2)中,培養液中含有白細胞介素-1、白細胞介素-2。
5.根據權利要求4所述的cik免疫細胞的體外誘導擴增方法,其特征在于:所述步驟(2)中,白細胞介素-1、白細胞介素-2的濃度分別為50-200U/mL,100-200U/mL。
6.根據權利要求1所述的cik免疫細胞的體外誘導擴增方法,其特征在于:所述步驟(2)中,保持細胞密度為0.8-1.2*106個/mL。
7.根據權利要求1所述的cik免疫細胞的體外誘導擴增方法,其特征在于:所述步驟(2)中,γ-干擾素溶液的濃度為500-1000U/mL。
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