[發明專利]一種P2Y12受體血小板凝集檢測試劑卡及其制備方法

在審

• 申請號: 201710738892.9
• 申請日: 2017-08-25
• 公開（公告）號: CN107607728A
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發明（設計）人: 郎天丹;李陽;魏明明;邱笑違;董颯英
• 申請（專利權）人: 北京樂普醫療科技有限責任公司
• 主分類號: G01N33/86
• 分類號: G01N33/86
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于醫用材料技術領域，涉及一種P2Y12受體血小板凝集檢測試劑卡制備方法及其應用。

背景技術

血小板在維持正常止血中起著關鍵的作用。當暴露于受損的血管時，血小板將粘附在暴露的內皮下基質上，隨后，在損傷的部位釋放或產生的各種因子(如凝血酶、ADP、或膠原等)激活血小板。血小板激活后，血小板上的糖蛋白GPIIb/IIIa受體發生構象改變，使得其與多價纖維蛋白原結合，導致鄰近的血小板補充到損傷部位并聚集形成止血塞或血栓。

體外血小板聚集依賴于血小板受到聚集誘導劑(凝血酶、二磷酸腺苷(ADP))作用而激活，使其與包被在微球上的纖維蛋白原結合而產生聚集。其中，ADP作為誘導劑可與血小板上受體之一即P2Y12受體結合，從而通過P2Y12受體途徑激活血小板活性，使得血小板上的糖蛋白IIb/IIIa受體與纖維蛋白原結合而產生聚集。血小板的聚集程度與活化的血小板上的GP IIb/IIIa受體數量成正比。當全血樣本中的血小板被誘發聚集后，全血樣本的透光率增加，通過檢測血小板聚集前后光學信號的變化來完成此項檢測。但由于個體血小板功能活性存在差異性，這可能導致患者術前或術后出現不同程度的血栓、出血等風險。因此，臨床上檢測患者的與P2Y12受體途徑相關的血小板凝集功能是非常必要的，同時采用光學比濁法的方法學也成為此項研究的關鍵技術。

目前，國內臨床上與P2Y12受體途徑相關的血小板凝集功能的檢測主要采用以下幾種方法：LTA法，血栓彈力圖法，閉合時間法，電阻抗法等，但這些方法測定耗時過長、操作復雜繁瑣、無法實現快速便捷的檢測。國外，Accumetrics,Inc.公司上市一種P2Y12受體相關血小板凝集功能檢測試劑盒(比濁法)產品，此產品是臨床上普遍認為質量較好的產品，具有特異性強、操作簡便、快速檢測等特點，且國內并無類似產品。

本發明者們致力于探尋一種能夠快速有效地檢測患者與P2Y12受體途徑相關的血小板凝集功能的檢測試劑卡及其檢測方法，其檢測原理及方法學與Accumetrics,Inc.公司生產的P2Y12受體相關血小板凝集功能檢測試劑盒(比濁法)產品相同。本公司研發的P2Y12受體血小板凝集檢測試劑卡(比濁法)需與本公司生產的全自動血小板聚集儀配合使用檢測與P2Y12受體途徑相關的血小板凝集功能，不僅樣本用量少，簡便快速，而且適合于即時檢測，不受時間、地點限制，24h全方位為患者服務，是今后床旁快速檢測發展的方向。

目前，國內并未出現關于采用光學比濁法快速檢測患者的血小板凝集功能的報道，因此，在本領域期望開發一種能夠快速有效地檢測患者血小板凝集功能的檢測試劑卡，從而為臨床醫生和患者提供預測接受P2Y12受體拮抗劑治療的患者未來發生血栓或出血的風險的有效輔助資料。

發明內容

本發明的目的在于提供一種P2Y12受體血小板凝集檢測試劑卡制備方法及其應用。

為達到此發明目的，本發明采用以下技術方案：

一方面，本發明提供一種P2Y12受體血小板凝集檢測試劑卡，所述檢測試劑卡包括如圖1所示由四個檢測通道組成，一通道中含有由BSA和纖維蛋白原包被的凍干試劑，無激活劑，二通道中含有由BSA和纖維蛋白原包被的凍干試劑，含血小板最大激活劑iso-TRAP(凝血酶受體激活肽)，三通道中不含凍干試劑，四通道中含有由BSA和纖維蛋白原包被的凍干試劑，含血小板P2Y12受體激活劑ADP(二磷酸腺苷)和P2Y1受體拮抗劑PGE1(前列腺素E1)。

本發明所述的檢測試劑卡利用光學比濁法快速有效地檢測患者與P2Y12受體途徑相關的血小板凝集功能，實現對全血樣品中血小板凝集功能進行有效評估，比傳統的比濁法和一般的血小板聚集功能檢測方法更快速有效。

優選地，所述凍干試劑包含聚苯乙烯或聚苯二乙烯微球。

優選地，所述微球粒徑為4-6μm，例如4μm、4.3μm、4.6μm、4.9μm、5.2μm、5.5μm、5.7μm或6μm。

優選地，所述微球功能官能基團為羧基基團，GPIIb/IIIa受體配體的氨基基團與微球羧基基團通過酰胺鍵牢固結合，均勻分布在微球表面。

優選地，所述凍干試劑中包含近紅外染料，當含有血小板的血液樣品和所述凍干試劑接觸時形成測定混合物，用近紅外光譜中的光照射所述測定混合物，并評估近紅外線在所述測定混合物中的透光率來評估由血小板介導的凝集。

在本發明中，微球在反應過程中起載體作用，通常過量添加，而GPIIb/IIIa受體配體用量則是根據微球的粒徑和用量來進行適當選擇。