[發明專利]一種靈敏探針及制備方法和利用其檢測腸炎沙門氏菌的方法

有效

• 申請號: 201710733861.4
• 申請日: 2017-08-22
• 公開（公告）號: CN107478833B
• 公開（公告）日: 2019-09-06
• 發明（設計）人: 王建龍;張道宏;補彤;閆靈芝;黃瓊;竇磊娜;趙兵欣;趙東陽
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 李紅媛

一種靈敏探針及制備方法和利用其檢測腸炎沙門氏菌的方法，它涉及一種探針及制備方法和探針的應用。本發明的目的是要解決現有探針昂貴、不穩定，抗體容易失活和靈敏度差的問題。一種靈敏探針由抗生素和信號載體制備而成，其制備方法為：一、制備黃棕色乳狀液；二、制備羧基化的免疫磁珠；三、制備活化的磁性微球；四、加入重懸液保存；利用靈敏探針檢測腸炎沙門氏菌的方法：一、制備腸炎沙門氏菌的免疫層析試紙條；二、待測液體與靈敏探針混合孵育，再逐滴滴加到腸炎沙門氏菌的免疫層析試紙條的樣品墊上，反應10分鐘，讀取結果。本發明只有一種抗體劃在硝酸纖維素膜上直接進行檢測，大大節省了成本，簡單，方便。本發明適用于檢測腸炎沙門氏菌。

技術領域

本發明涉及一種探針及制備方法和探針的應用。

背景技術

細菌感染性疾病導致的死亡人數占全球死亡人數的三分之一，這一直是一個重要的公共衛生問題。因此，早期識別細菌的感染通過即時檢測(POC)對水，食物和臨床診斷的安全至關重要。免疫層析試紙條，由于其制備和操作方便，成本低，一次性使用，檢測時間短，結果直觀可靠等優點，不需要專門的設備，是最常見的即時檢測診斷工具，用于各種蛋白質、抗生素、金屬離子、毒素等的檢測。典型的夾心試紙條使用具有特異性的生物成分，如抗體，基于抗原抗體特異性結合原理，樣品中的靶分子與結合墊上的金標抗體探針反應形成靶分子-金標探針復合物，此復合物再與在硝酸纖維素(NC)膜上測試的另一配對的抗體結合誘導出肉眼可見的顏色變化。

雖然試紙條的工作原理很簡單，但不能直接應用于實際樣品中食源性細菌的檢測，因為食品樣品中細菌的濃度非常低，大部分都是食物殘渣。可以通過使用磁性納米顆粒來解決這個問題，這使得靶細菌從大量樣品溶液中捕獲，分離和濃縮成小體積的溶液進行檢測。然而，由于抗體的活性易受環境影響，在不同樣品中，如有機樣品提取中會失活，如材料標記過程中pH，鹽等，都對抗體的活性有影響；對于夾心形式而言，制備抗體本身很困難，篩選到能識別同一靶目標的不同表位能形成配對的抗體更難，且成本高，靈敏度差，對腸炎沙門氏菌的最低檢測限為400CFU/mL～10⁵CFU/mL。

發明內容

本發明的目的是要解決現有探針昂貴、不穩定，抗體容易失活和靈敏度差的問題，而提供一種靈敏探針及制備方法和利用其檢測腸炎沙門氏菌的方法。

一種靈敏探針由抗生素和信號載體制備而成；所述的抗生素為氨芐青霉素；所述的信號載體為羧基化的免疫磁珠。

一種靈敏探針的制備方法，具體是按以下步驟完成的：

一、將FeCl₃·6H₂O和二水合檸檬酸三鈉加入到乙二醇中，再在溫度為36℃～37℃和轉速為200r/min～300r/min的氣浴搖床中溶解30min～60min，再加入醋酸鈉，再在溫度為36℃～37℃和轉速為200r/min～300r/min的氣浴搖床中溶解30min～60min，得到黃棕色乳狀液；

步驟一中所述的FeCl₃·6H₂O的質量與乙二醇的體積比為(0.5g～1g):(10mL～30mL)；

步驟一中所述的FeCl₃·6H₂O與二水合檸檬酸三鈉的質量比為(0.5～1):(0.1～0.4)；

步驟一中所述的FeCl₃·6H₂O與醋酸鈉的質量比為(0.5～1):(1～2)；

二、將步驟一中得到的黃棕色乳狀液轉移至聚四氟乙稀內襯的反應釜中，再將聚四氟乙稀內襯的反應釜在溫度為190℃～210℃的烘箱中放置8h～12h，再自然冷卻至室溫，得到黑褐色產物；首先使用無水乙醇對黑褐色產物清洗3次～5次，再使用超純水對黑褐色產物清洗3次～5次，最后在溫度為60℃～70℃下烘干，得到羧基化的免疫磁珠；