[發(fā)明專利]一種同時測定煙草及煙草制品中12種生物堿的方法

在審

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• 申請日: 2017-08-23
• 公開（公告）號: CN107290458A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發(fā)明（設計）人: 韓書磊;陳歡;付亞寧;劉彤;李翔宇;張洪非;羅彥波;龐永強;韓雪;侯宏衛(wèi);胡清源
• 申請（專利權）人: 國家煙草質量監(jiān)督檢驗中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司41110
• 代理人: 姜振東

技術領域

本發(fā)明屬于理化分析技術領域，具體涉及一種同時測定煙草及煙草制品中12種生物堿的方法。

背景技術

生物堿是指一類存在于生物體內的含有氮雜環(huán)的有機化合物（蛋白質、鈦類、氨基酸、氨、氨基糖、核苷酸、核酸除外），一般具有堿性并表現(xiàn)出生理活性。生物堿在煙草及其制品中具有特殊的地位，它不僅是煙草重要的品質因素，而且規(guī)定了煙草作為一種商品的特質。煙堿占煙草總生物堿的比例一般在92%以上，人們吸食煙草很大程度上是為了獲取煙堿，所以是煙草中最重要的生物堿，它的存在賦予煙草及其制品以獨特的魅力。除煙堿外，煙草中還含有其他次要生物堿，在煙草中含量較多、人們研究較多的生物堿主要有降煙堿、新煙草堿、假木賊堿、麥斯明等，這些次要生物堿也具有一定的生物活性，且是煙草及煙草制品中重要致癌物——煙草特有亞硝胺（TSNAs）的直接前體物質。此外，煙草中煙堿之外的次要生物堿研究還是判定電子煙等新型煙草制品中煙堿來源的重要特征性指標，這對電子煙等產品的管制有重要的理論和現(xiàn)實意義。

目前，測定煙草及煙草制品中生物堿的方法主要有氣相色譜法（GC-FID/NPD/NCD）、氣相色譜-質譜聯(lián)用法（GC-MS）、氣相色譜-串聯(lián)質譜法（GC-MS/MS）高效液相色譜法（HPLC-UVD）、毛細管電泳法（CZE-UVD）等。但是，這些研究的次要生物堿主要集中在降煙堿、新煙草堿、假木賊堿、麥斯明等，而對其他次要生物堿的研究較少。例如，當前文獻報道測定煙草中生物堿數(shù)量最多為8種，使用的是GC-NCD方法（Anal. Methods. 2012;4(7):2095-2100.）和LC-MS/MS方法（J. Chromatogr. Sci. 2015;53(10):1730-1736.），但是GC-NCD方法選擇性不是很好，容易出現(xiàn)假陽性結果，而LC-MS/MS對部分目標物的檢出限偏高，且分離效果不理想。Lisko等使用GC-MS/MS分析煙草中的生物堿（降煙堿、新煙堿、麥斯明、假木賊堿、2,3’-聯(lián)吡啶），但目標物僅有5個（Anal. Chem. 2013;85(6):3380-3384.）。現(xiàn)行國內行業(yè)標準為5種生物堿（煙堿、降煙堿、新煙堿、麥斯明、假木賊堿），CPRESTA推薦方法為2種生物堿（降煙堿、假木賊堿），并都使用GC-MS作為儀器分析方法，所以，氣相色譜-質譜聯(lián)用法由于其強大的分離能力及定性定量能力，是生物堿分析最常用的儀器分析方法，所以綜合考慮到儀器普適性、選擇性及靈敏度，最終選擇NaOH水溶液+有機溶劑萃取的前處理方法，選擇GC-MS作為分析儀器。

所以，為了實現(xiàn)更高通量的次要生物堿分析要求，我們根據(jù)文獻調研，對次要生物堿指標進行擴展，最終確定了12種生物堿作為研究對象，并首次建立了GC-MS同時測定煙草及煙草制品中12種煙草生物堿的方法，具體包括煙堿、N-甲基假木賊堿、降煙堿、麥斯明、假木賊堿、β-二烯煙堿、新煙草堿、2,3’-聯(lián)吡啶、β-二烯降煙堿、可替寧、哈爾堿、煙臺林等。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的正是基于上述技術不足，建立了一種同時測定煙草及煙草制品中12種生物堿的GC-MS高通量檢測方法。本方法經過一次樣品前處理過程即可同時測定煙草及煙草制品中的12種生物堿，具有操作簡便、通量高、靈敏度高、回收率及重復性好等優(yōu)點。

本發(fā)明的目的是通過以下技術方案來實現(xiàn)的：

一種同時測定煙草及煙草制品中12種生物堿的方法，所述12種生物堿分別為：煙堿、N-甲基假木賊堿、降煙堿、麥斯明、假木賊堿、β-二烯煙堿、新煙草堿、2,3’-聯(lián)吡啶、β-二烯降煙堿、可替寧、哈爾堿、煙臺林，使用5%的氫氧化鈉溶液先將目標樣品中的生物堿游離出來，再用二氯甲烷/甲醇混合溶液(V_二氯甲烷/V_甲醇=4:1)進行液液萃取，以氣相色譜-質譜聯(lián)用法進行測定，內標法定量，具體包括以下步驟：

1）標準工作溶液的制備

分別制備具有5級濃度梯度的煙堿標準工作溶液，具有6級濃度梯度的降煙堿標準工作溶液及具有12級濃度梯度的其他10種次要生物堿標準工作溶液，其中，煙堿的定量采用喹啉作為內標，降煙堿的定量采用降煙堿-2,4,5,6-d₄作為內標，其它次要生物堿的定量采用2,2’-聯(lián)吡啶-d₈作為內標；

2）樣品前處理