[發(fā)明專利]一種同時測定煙草及煙草制品中12種生物堿的方法

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• 申請日: 2017-08-23
• 公開（公告）號: CN107290458A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韓書磊;陳歡;付亞寧;劉彤;李翔宇;張洪非;羅彥波;龐永強;韓雪;侯宏衛(wèi);胡清源
• 申請（專利權(quán)）人: 國家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司41110
• 代理人: 姜振東

1.一種同時測定煙草及煙草制品中12種生物堿的方法，所述12種生物堿分別為：煙堿、N-甲基假木賊堿、降煙堿、麥斯明、假木賊堿、β-二烯煙堿、新煙草堿、2,3’-聯(lián)吡啶、β-二烯降煙堿、可替寧、哈爾堿、煙臺林，其特征在于：使用5%的氫氧化鈉溶液將目標(biāo)樣品中的生物堿游離出來，再用二氯甲烷/甲醇混合溶液進行液液萃取，以氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法進行測定，內(nèi)標(biāo)法定量，具體包括以下步驟：

1）標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備

分別制備具有5級濃度梯度的煙堿標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，具有6級濃度梯度的降煙堿標(biāo)準(zhǔn)工作溶液及具有12級濃度梯度的其他10種次要生物堿標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，其中，煙堿的定量采用喹啉作為內(nèi)標(biāo)，降煙堿的定量采用降煙堿-2,4,5,6-d₄作為內(nèi)標(biāo)，其它次要生物堿的定量采用2,2’-聯(lián)吡啶-d₈作為內(nèi)標(biāo)；

2）樣品前處理

準(zhǔn)確稱取0.1-0.5 g煙草樣品于15 mL塑料離心管中，再分別加入內(nèi)標(biāo)溶液和5%氫氧化鈉溶液，震蕩混勻后，靜置20 min；然后加入5-10 mL二氯甲烷/甲醇混合溶液，加蓋密封后置于渦旋振蕩器中，以500-2500 rpm的速度渦旋振蕩提取40-60 min；以10000 rpm的速度離心5 min后，取下層有機相轉(zhuǎn)移到色譜分析瓶中進行GC-MS分析，

3）氣相色譜-質(zhì)譜分析

利用氣相色譜儀配備質(zhì)譜檢測器對所制待測樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進行分析，得到相關(guān)色譜圖，其中，煙堿和11種次要生物堿分析分別采用兩種不同的分析步驟，其分析條件為：

色譜柱為DB-35MS毛細(xì)管色譜柱，規(guī)格：30 m × 0.25 mm × 0.25 μm；

進樣口溫度：250 ℃；進樣量：1 μL；載氣：氦氣，純度≥99.999%，恒流模式，流速：1.0 mL/min；

采用兩針進樣，分別按照兩組升溫程序運行：

煙堿柱升溫程序：分流進樣（分流比：100:1）；溶劑延遲：5 min；升溫程序：初始溫度80 ℃，保持1 min，以20 ℃/min的速率至200 ℃，再以40 ℃/min的速率至250 ℃，保持5 min，運行總時間為13.25 min；

次要生物堿堿柱升溫程序：分流進樣（分流比：10:1）；溶劑延遲：12 min；升溫程序：初始溫度80 ℃，保持1 min，以8 ℃/min的速率至250 ℃，保持1 min，再以40 ℃/min的速率至280 ℃，保持5 min，運行總時間為29 min；

電離方式：電子轟擊源（EI）；電離能量：70 eV；傳輸線溫度：280 ℃；離子源溫度：250 ℃；掃描離子范圍：80～250 amu；質(zhì)譜掃描方式：選擇離子監(jiān)視方式（SIM）掃描，目標(biāo)物及內(nèi)標(biāo)的保留時間、定量及定性選擇離子參數(shù)如下表1所示

4）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制及結(jié)果計算。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述煙草及煙草制品包括所有具有煙草形態(tài)及含有煙草的煙草及煙草制品，如不同品種的煙葉樣品（烤煙、白肋煙、香料煙、雪茄煙、馬里蘭煙等）、無煙氣煙草制品、雪茄煙、加熱不燃燒型卷煙、煙用薄片、卷煙煙絲。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述二氯甲烷/甲醇混合溶液的混合比例為V_二氯甲烷/V_甲醇=4:1。