[發明專利]MSCs來源的雪旺細胞的制備方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201710728042.0
• 申請日: 2017-08-23
• 公開（公告）號: CN107384862B
• 公開（公告）日: 2020-08-04
• 發明（設計）人: 張洪鈿;苑春慧
• 申請（專利權）人: 北京再生生物科技研究院有限公司
• 主分類號: C12N5/079
• 分類號: C12N5/079
• 代理公司: 北京紐樂康知識產權代理事務所(普通合伙) 11210
• 代理人: 丁偉

本發明公開了一種MSCs來源的雪旺細胞制備試劑盒，包括SCs無血清基礎培養基、SCs培養添加劑1、SCs培養添加劑2及SCs培養表面包被液，其中，SCs無血清基礎培養基為含有B27，無動物源成分血清替代品，人二氫睪丸酮，L?谷氨酰胺的DMEM/F12；SCs培養添加劑1為含有重組人堿性成纖維細胞生長因子、重組人表皮生長因子、全反式維甲酸的DMEM/F12；SCs培養添加劑2為含有重組人堿性成纖維細胞生長因子、毛喉素、重組人血小板來源生長因子AA、重組人神經膠質細胞生長因子?2的DMEM/F12；SCs培養表面包被液為含有重組人層黏連蛋白、重組人纖黏連蛋白、重組人調蛋白?β1的DMEM/F12。本發明提出的雪旺細胞制備試劑盒，具有操作簡單、無動物源成分的優勢，獲得的SCs均一性好、產率高。

技術領域

本發明涉及細胞培養技術領域，具體來說，涉及一種MSCs來源的雪旺細胞的制備方法及試劑盒。

背景技術

神經細胞在生理學方面屬于不可再生細胞，當神經損傷發生時，常規的治療手段是周圍神經移植來進行修復。自體神經移植一方面會帶來新的神經損傷，另一方面，由于神經再生不全、遠端接合口纖維化、疤痕化和神經瘤發生等影響神經功能恢復。近些年的研究發現，周圍神經系統的組織學微環境是神經再生修復的關鍵因素，而雪旺細胞（Schwanncells ，SCs）是微環境的重要組成部分。諸多研究表明，SCs與周圍細胞外基質成分相互作用穩定髓磷脂的生理狀態，在神經再生過程中誘導髓鞘形成，并分泌多種神經營養和嗜神經因子促進軸突再生，SCs移植在脫髓鞘、神經退行性、外傷性神經損傷等疾病的細胞治療領域的應用受到廣泛關注。

既往SCs多分離自自體神經周圍組織，其取材受限，提取復雜，細胞收率低，限制了雪旺細胞的臨床研究和產品化。近年來的研究發現，多種來源的間充質干細胞（mesenchymal stem cells，MSCs）具有SCs分化潛能。目前，多個實驗室披露的誘導SCs分化的方法需要β-巰基乙醇、全反式維甲酸兩次預誘導，然后使用SCs誘導培養基，不經過Nestin+神經前體細胞階段，不符合雪旺細胞發育規律，且步驟繁瑣，使用胎牛血清，得到的SCs均一性差、產率低。因此，研究如何從MSCs制備，按SCs發育程序誘導，能夠用于臨床的、組織工程產品的純度高、數量大的雪旺細胞是關鍵環節。

針對相關技術中的問題，目前尚未提出有效的解決方案。

發明內容

針對相關技術中的上述技術問題，本發明提出一種MSCs來源的雪旺細胞制備方法及試劑盒，具有操作簡單、無動物源成分的優勢，獲得的SCs均一性好、產率高的特點。

為實現上述技術目的，本發明的技術方案是這樣實現的：

一種MSCs來源的雪旺細胞制備試劑盒，包括SCs無血清基礎培養基、SCs培養添加劑1、SCs培養添加劑2及SCs培養表面包被液，其中，

所述SCs無血清基礎培養基為含有B27，無動物源成分血清替代品，人二氫睪丸酮，L-谷氨酰胺的DMEM/F12；

所述SCs培養添加劑1為含有重組人堿性成纖維細胞生長因子、重組人表皮生長因子、全反式維甲酸的DMEM/F12；

所述SCs培養添加劑2為含有重組人堿性成纖維細胞生長因子、毛喉素、重組人血小板來源生長因子AA、重組人神經膠質細胞生長因子-2的DMEM/F12；

所述SCs培養表面包被液為含有重組人層黏連蛋白、重組人纖黏連蛋白、重組人調蛋白-β1的DMEM/F12。

進一步地，

所述SCs無血清基礎培養基為含有1×B27，10%無動物源成分血清替代品，5nM人二氫睪丸酮，2mM L-谷氨酰胺的DMEM/F12；