[發(fā)明專利]MSCs來源的雪旺細胞的制備方法及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710728042.0
• 申請日: 2017-08-23
• 公開（公告）號: CN107384862B
• 公開（公告）日: 2020-08-04
• 發(fā)明（設計）人: 張洪鈿;苑春慧
• 申請（專利權）人: 北京再生生物科技研究院有限公司
• 主分類號: C12N5/079
• 分類號: C12N5/079
• 代理公司: 北京紐樂康知識產權代理事務所(普通合伙) 11210
• 代理人: 丁偉

1.一種MSCs來源的雪旺細胞制備試劑盒，其特征在于，包括SCs無血清基礎培養(yǎng)基、SCs培養(yǎng)添加劑1、SCs培養(yǎng)添加劑2及SCs培養(yǎng)表面包被液，其中，

所述SCs無血清基礎培養(yǎng)基為含有B27，無動物源成分血清替代品，人二氫睪丸酮，L-谷氨酰胺的DMEM/F12；

所述SCs培養(yǎng)添加劑1為含有重組人堿性成纖維細胞生長因子、重組人表皮生長因子、全反式維甲酸的DMEM/F12；

所述SCs培養(yǎng)添加劑2為含有重組人堿性成纖維細胞生長因子、毛喉素、重組人血小板來源生長因子AA、重組人神經膠質細胞生長因子-2的DMEM/F12；

所述SCs培養(yǎng)表面包被液為含有重組人層黏連蛋白、重組人纖黏連蛋白、重組人調蛋白-β1的DMEM/F12。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種MSCs來源的雪旺細胞制備試劑盒，其特征在于，

所述SCs無血清基礎培養(yǎng)基為含有1×B27，10%無動物源成分血清替代品，5nM人二氫睪丸酮，2mM L-谷氨酰胺的DMEM/F12；

所述SCs培養(yǎng)添加劑1為含有1 ug /mL重組人堿性成纖維細胞生長因子、1 ug /mL重組人表皮生長因子、2ug/ml 全反式維甲酸的DMEM/F12；

所述SCs培養(yǎng)添加劑2為含有0.5 ug/mL 重組人堿性成纖維細胞生長因子、0.5mM毛喉素、250 ng/mL重組人血小板來源生長因子AA、2.5ug/mL重組人神經膠質細胞生長因子-2的DMEM/F12；

所述SCs培養(yǎng)表面包被液為含有100ng/mL重組人層黏連蛋白、100ng/mL重組人纖黏連蛋白、1ug/mL 重組人調蛋白-β1的DMEM/F12。

3.一種MSCs來源的雪旺細胞制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.用SCs培養(yǎng)表面包被液包被培養(yǎng)表面；

S2.P2代的MSCs以MSCs培養(yǎng)基培養(yǎng)至60-70%匯合；

S3.換含SCs培養(yǎng)添加劑1的SCs無血清基礎培養(yǎng)基，培養(yǎng)至80-90%匯合，用胰蛋白酶溶液消化收獲細胞，記為神經上皮預誘導細胞；

S4.以含SCs培養(yǎng)添加劑2的SCs無血清基礎培養(yǎng)基重懸神經上皮預誘導細胞，接種至被SCs培養(yǎng)表面包被液包被的培養(yǎng)表面，培養(yǎng)至60-80%匯合時傳代，記為P0代SCs；

其中，

所述SCs無血清基礎培養(yǎng)基為含有B27，無動物源成分血清替代品，人二氫睪丸酮，L-谷氨酰胺的DMEM/F12；

所述SCs培養(yǎng)添加劑1為含有重組人堿性成纖維細胞生長因子、重組人表皮生長因子、全反式維甲酸的DMEM/F12；

所述SCs培養(yǎng)添加劑2為含有重組人堿性成纖維細胞生長因子、毛喉素、重組人血小板來源生長因子AA、重組人神經膠質細胞生長因子-2的DMEM/F12；

所述SCs培養(yǎng)表面包被液為含有重組人層黏連蛋白、重組人纖黏連蛋白、重組人調蛋白-β1的DMEM/F12。

4.根據(jù)權利要求3所述的一種MSCs來源的雪旺細胞制備方法，其特征在于，

所述含SCs培養(yǎng)添加劑1的SCs無血清基礎培養(yǎng)基中SCs培養(yǎng)添加劑1含量為2%；

所述含SCs培養(yǎng)添加劑2的SCs無血清基礎培養(yǎng)基中SCs培養(yǎng)添加劑2的含量為2%。

5.根據(jù)權利要求3所述的一種MSCs來源的雪旺細胞制備方法，其特征在于，所述步驟S4后還包括如下步驟：將P0代SCs按常規(guī)貼壁細胞傳代方法傳代，收獲P1代細胞。

6.根據(jù)權利要求5所述的一種MSCs來源的雪旺細胞制備方法，其特征在于，所述常規(guī)貼壁細胞傳代方法傳代過程中的接種密度為2×10⁴/cm²，培養(yǎng)體系為含2%SCs培養(yǎng)添加劑2的SCs無血清基礎培養(yǎng)基；培養(yǎng)表面為經SCs培養(yǎng)表面包被液包被的培養(yǎng)表面。

7.根據(jù)權利要求3所述的一種MSCs來源的雪旺細胞制備方法，其特征在于，所述MSCs來源于人臍帶、羊膜、羊水、胎盤、臍帶血、宮膜、牙髓、骨髓、皮膚、骨骼肌組織。