[發明專利]一種胃蛋白酶測定試劑盒及測定方法

有效

• 申請號: 201710724619.0
• 申請日: 2017-08-22
• 公開（公告）號: CN107727861B
• 公開（公告）日: 2019-10-22
• 發明（設計）人: 許元峰;袁新;呂懷谷;袁玲;趙靜
• 申請（專利權）人: 廈門依柯利斯醫療科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558;G01N33/533
• 代理公司: 廈門市首創君合專利事務所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭;秦彥蘇

本發明公開了一種胃蛋白酶測定試劑盒及測定方法，該試劑盒包括試紙條和反應液；所述試紙條包括本體，該本體包括背襯底板，該背襯底板上設有樣品結合墊、硝酸纖維素膜和吸水膜，該樣品結合墊和吸水膜分別疊壓在硝酸纖維素膜的兩端上；該硝酸纖維素膜上設有檢測線，該檢測線包被有抗胃蛋白酶底物的單克隆抗體；所述反應液含有經標記的胃蛋白酶底物。本發明利用胃蛋白酶消化蛋白質的特性使底物失去反應原性的特點，通過檢測被胃蛋白酶消化后剩余的具有反應原性的底物的量來間接定性和/或定量檢測胃蛋白酶，具有靈敏度好、精密度高、易于操作的特點。

技術領域

本發明屬于胃蛋白酶檢測技術領域，具體涉及一種胃蛋白酶測定試劑盒及測定方法。

背景技術

胃食管反流是指胃液等胃內容物反流至食管、咽喉乃至口腔的疾病，常引起燒心、胸痛、咽異物感、咳嗽等癥狀，并可由于胃液中的胃蛋白酶破壞食管、咽喉、氣道黏膜，損害細胞間或細胞膜上的蛋白，引起一系列并發癥，是常見的消化科疾病之一。近年來逐漸認為唾液中的胃蛋白酶檢測對胃食管反流有一定的診斷參考價值，但ELISA等胃蛋白酶檢測方法操作繁瑣，檢測時間長。因此，建立一種能夠快速檢測胃蛋白酶的檢測手段對于輔助診斷胃食管反流具有非常重要的意義。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足之處，提供了一種胃蛋白酶測定試劑盒及測定方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案之一是：

一種胃蛋白酶測定試劑盒，包括試紙條和反應液；所述試紙條包括本體，該本體包括背襯底板，該背襯底板上設有樣品結合墊、硝酸纖維素膜和吸水膜，該樣品結合墊和吸水膜分別疊壓在硝酸纖維素膜的兩端上；該硝酸纖維素膜上設有檢測線，該檢測線包被有抗胃蛋白酶底物的單克隆抗體；所述反應液含有經標記的胃蛋白酶底物。標本中胃蛋白酶消化底物后，該被消化的底物無法與抗體進行結合，即無法被檢測線所捕獲，即檢測線的有色標記或熒光標記則減少。

一實施例中：所述胃蛋白酶底物為合成肽。

一實施例中：所述經標記的胃蛋白酶底物的標記物為有色標記或熒光標記，例如標記熒光素、膠體金、量子點、有色乳膠顆粒或熒光乳膠顆粒。

一實施例中：所述樣品結合墊上含有胃蛋白酶抑制劑和pH緩沖液，用于終止胃蛋白酶催化反應及調整pH值至適合抗原抗體反應的范圍。

一實施例中：還包括能夠終止胃蛋白酶催化反應及調整pH值至適合抗原抗體反應的范圍的終止液。

一實施例中：所述試紙條還包括殼體，所述本體設在殼體內；所述殼體上在對應樣品結合墊的位置開設有加樣孔；所述殼體上在對應檢測線的位置開設有觀察窗。

一實施例中：還包括試劑瓶，該試劑瓶內盛裝有所述反應液。

一實施例中：還包括盒體，所述試紙條和試劑瓶位于盒體內。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案之二是：

一種胃蛋白酶測定方法，包括：

1)將待測樣本與反應液反應，該反應液含有經標記的胃蛋白酶底物；

2)將步驟1)的產物終止消化，剩余的經標記的胃蛋白酶底物與抗胃蛋白酶底物的單克隆抗體反應，生成經標記的底物-抗體復合物；

3)檢測經標記的底物-抗體復合物的量，從而對待測樣本中的胃蛋白酶進行間接定性和/或定量檢測。

一實施例中：應用上述的試劑盒的胃蛋白酶測定方法，包括：

1)將待測樣本與所述反應液反應；