[發明專利]一種小葉楊與胡楊雜交種再生苗的培育方法

有效

• 申請號: 201710721972.3
• 申請日: 2017-08-22
• 公開（公告）號: CN107810850B
• 公開（公告）日: 2020-06-16
• 發明（設計）人: 王方琳;尉秋實;柴成武;王飛
• 申請（專利權）人: 甘肅省治沙研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 王新生

1.一種小葉楊與胡楊雜交種再生苗的培育方法，其特征在于：包括以下步驟，

S1、建立外植體滅菌及無菌體系：于4～5月份，在室外生長的小與胡楊植株上剪取長20～30cm的當年生枝條，用軟毛刷蘸取已加入清洗劑的自來水清洗外植體枝條表面的污漬及灰塵，之后用玻璃棒蘸取一滴吐溫80對枝條進行深層清洗，清洗后將外植體枝條置于流水下沖洗4～6個小時，之后置于超凈工作臺上進行滅菌處理；

S2、不定芽誘導與增殖：

A)、將完成滅菌處理的外植體材料放置在經過高壓滅菌處理并鋪有雙層濾紙的培養皿中，剪除前后兩端切口，保留莖段與葉片部分，莖段剪至長0.5cm長的小段，葉片剪至0.5cm×0.5cm的小片，并將四周邊緣部分剪除，之后平鋪接種至不定芽誘導培養基表面，用鑷子輕輕按壓使葉片與莖段的切口部分分別與培養基充分接觸，最后進行封口培養；

B)、培養條件：接種后首先在暗環境中培養3天，之后置于溫度24±2℃、光照強度1500～2000lx、光照時間14h/d的環境中培養；

S3、生根培養：

A)、選取步驟S2培養30天～40天、生長健壯、高2～3cm的小與胡楊不定芽為試驗材料，剪取不定芽接種于盛有生根培養基的瓶中進行封口培養試管苗；

B)、培養條件：培養室溫度設置為25℃，先暗培養4天，4天后逐漸增強光照強度且光照時間為12h/d，培養40天～50天后光照強度控制在1800～2200lx且光照時間為12h/d；

S4、煉苗移栽：選擇經過40天～50天生根培養、根系發達、生長健壯的試管苗，先將瓶蓋打開1/2后注入100ml蒸餾水，室內自然光下放置3天后將瓶蓋全部打開，添加50ml蒸餾水，繼續置于室內自然光下放置2天，隨后將瓶苗移至溫室全部打開瓶蓋后放置2天后，用清水清洗瓶苗根部的培養基，清洗干凈后移栽至蛭石、鋸末、泥炭土的混合基質中，移栽完成后放置在苗床上，苗床上部覆蓋規格為50％～70％的雙層遮蔭網，避免陽光直射，每天傍晚進行噴灌澆水，保證營養缽內土壤濕度為60％～80％，試管苗移栽定植15天后，根據土壤干濕情況適當增減澆水量，溫室條件下生長30天后即可進行露地移栽定植

步驟S2中的誘導培養基配方為改良WPM+6-BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L+KT0.1mg/L+活性炭3.0g/L+瓊脂4.5g/L+蔗糖30g/L，誘導培養基Ph6.0。

2.根據權利要求1所述的小葉楊與胡楊雜交種再生苗的培育方法，其特征在于：步驟S1中滅菌處理具體操作步驟如下，首先采用75％的乙醇對外植體枝條滅菌10s～30s，之后用無菌水沖洗3～5次；第二步用濃度為0.1％的HgC1₂消毒3～5min，之后用無菌水沖洗5～7次，最后用經過高壓滅菌的濾紙吸干外植體表面殘留的水分后接種。

3.雜交種再生苗的培育方法，其特征在于：根據權利要求1所述的小葉楊與胡楊雜交種再生苗的培育方法，其特征在于：步驟S3中的生根培養基配方為1/2WPM+蛋白胨1g/L+IBA0.4mg/L+香蕉150g/L+活性炭3.0g/L瓊脂4.5g/L+蔗糖30g/L。

4.根據權利要求1所述的小葉楊與胡楊雜交種再生苗的培育方法，其特征在于：步驟S4中蛭石、鋸末、泥炭土三種基質的體積比例為2：1：1。