[發(fā)明專利]一種能同時(shí)檢測(cè)對(duì)乙酰氨基酚及其8種血漿代謝產(chǎn)物的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710719444.4
• 申請(qǐng)日: 2017-08-21
• 公開（公告）號(hào): CN107490640B
• 公開（公告）日: 2020-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李鷹飛;李川;楊軍令;吳思玚;張躍飛;朱玉華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華潤三九（棗莊）藥業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/72;G01N30/34;G01N30/06
• 代理公司: 北京三聚陽光知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11250
• 代理人: 張倩倩;李敏

1.一種能同時(shí)檢測(cè)對(duì)乙酰氨基酚及其8種血漿代謝產(chǎn)物的方法，所述8種血漿代謝產(chǎn)物為：4-硫酸-對(duì)乙酰氨基酚M1、葡萄醛酸化對(duì)乙酰氨基酚M2、3-羥基-對(duì)乙酰氨基酚M3、3-甲氧基-對(duì)乙酰氨基酚M3-3、對(duì)乙酰氨基酚谷胱甘肽二鈉鹽M4、3-半胱氨酰-對(duì)乙酰氨基酚M5、硫甲基3-嗪-對(duì)乙酰氨基酚M5-1、3-N-乙酰-半胱氨硫酰-對(duì)乙酰氨基酚M5-2；

該方法包括以下步驟：

(1)內(nèi)標(biāo)物對(duì)照品溶液的配置

配置含有濃度為90～110ng/mL的木蝴蝶苷OA和濃度為9～11μg/mL的非那西汀PNT的對(duì)照品溶液，-18～-22℃放置備用，即得內(nèi)標(biāo)物對(duì)照品溶液；

(2)供試品溶液的配置

取解凍后的大鼠血漿樣品45～55μL，加入所述內(nèi)標(biāo)物對(duì)照品溶液9～11μL和蛋白沉淀劑135～165μL，攪拌、混合均勻，作為供試品溶液；

(3)檢測(cè)條件

液相色譜分離條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以含有體積濃度0.09～0.11％HCOOH的體積比為95：5的水-乙腈溶液為流動(dòng)相A、以含有體積濃度0.1％HCOOH的乙腈為流動(dòng)相B進(jìn)行洗脫，流速0.2～0.4mL/min，柱溫22～28℃，自動(dòng)進(jìn)樣器溫度：3～5℃，進(jìn)樣量為4～6μL；

質(zhì)譜檢測(cè)條件：采用ESI離子源，選擇質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM工作方式進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析，以非那西汀PNT為內(nèi)標(biāo)物，在正離子檢測(cè)方式下檢測(cè)對(duì)乙酰氨基酚APAP、3-甲氧基-對(duì)乙酰氨基酚M3-3、3-羥基-對(duì)乙酰氨基酚M3、對(duì)乙酰氨基酚谷胱甘肽二鈉鹽M4和硫甲基3-嗪-對(duì)乙酰氨基酚M5-1；以木蝴蝶苷OA為內(nèi)標(biāo)物，在負(fù)離子檢測(cè)方式下檢測(cè)4-硫酸-對(duì)乙酰氨基酚M1、葡萄醛酸化對(duì)乙酰氨基酚M2、3-半胱氨酰-對(duì)乙酰氨基酚M5和3-N-乙酰-半胱氨硫酰-對(duì)乙酰氨基酚M5-2；

(4)測(cè)定

取供試品溶液的上清液135～165μL，進(jìn)樣4～6μL，測(cè)定，即得；

所述步驟(3)中，所述液相色譜分離條件中，所述流動(dòng)相按照如下程序進(jìn)行洗脫：

時(shí)間，min	流速，mL/min	A：B的體積比	Curve
0	0.3	100:0	初始
3	0.3	40:60	6
4	0.3	40:60	6
6	0.3	100:0	1

。