[發(fā)明專利]環(huán)二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile在防治青枯病中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710717668.1
• 申請(qǐng)日: 2017-08-21
• 公開（公告）號(hào): CN107624768B
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄧音樂(lè);宋施豪;付書娜;孫秀云;鄧海飛;神方芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A01N43/90
• 分類號(hào): A01N43/90;C07D487/04;C12P17/18;A01P1/00;C12R1/19
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運(yùn)貞

本發(fā)明公開了環(huán)二肽cyclo?((S)?pro?(R)?Ile在防治青枯病中的應(yīng)用。本發(fā)明發(fā)明人首次發(fā)現(xiàn)了環(huán)二肽cyclo?((S)?pro?(R)?Ile對(duì)青枯菌有很強(qiáng)的抑制作用，為新型的青枯病生防制劑的制備提供了新的選擇。本發(fā)明提供的環(huán)二肽cyclo?((S)?pro?(R)?Ile的制備方法，是以大腸埃希氏菌(Escherichia coli)GZ?34為菌種，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)、分離和提純得到；該方法步驟簡(jiǎn)潔，操作簡(jiǎn)單，這有利于進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物病害防治領(lǐng)域，特別涉及環(huán)二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile在防治青枯病中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

植物細(xì)菌性青枯病是由青枯勞爾氏菌Ralstonia solanacearum引起的一種維管束毀滅性土傳細(xì)菌性病害，在亞熱帶、熱帶和溫帶地區(qū)發(fā)生普遍系統(tǒng)侵染的毀滅性土傳病害，俗稱“植物瘟病”。青枯勞爾氏菌寄主廣泛，可侵染54個(gè)科的450余種植物。目前，細(xì)菌性青枯病的防治是世界公認(rèn)的一大難題，它廣泛分布于世界各地，在我國(guó)南方省市發(fā)生嚴(yán)重，尤其在浙江，近年來(lái)不但茄科、瓜類受害，大面積發(fā)生的桑青枯病更對(duì)蠶業(yè)生產(chǎn)造成嚴(yán)重?fù)p失。

青枯菌有很多小種，根據(jù)青枯菌的寄主范圍分為5個(gè)生理小種，小種1主要危害多數(shù)茄科植物，包括番茄、馬鈴薯、茄子和煙草等，還危害其他科植物；小種2能侵染香蕉、海里康(Heliconais)和大蕉等植物；小種3主要危害馬鈴薯，也可弱侵染煙草和番茄；小種4侵染姜以及弱侵染馬鈴薯等其他植物。另有研究人員將從我國(guó)南方桑樹上分離到的青枯病菌株命名為小種5。侵染馬鈴薯的青枯病菌主要是小種l和小種3。

目前，青枯病的防治方法主要有加強(qiáng)田間管理、培育抗病品種、使用化學(xué)藥劑和施用生防菌劑等，但實(shí)踐證明，田間管理難以有效控制青枯病發(fā)生，抗性材料的選育耗時(shí)長(zhǎng)，而化學(xué)防治污染環(huán)境、破壞生態(tài)平衡，且化學(xué)藥劑的長(zhǎng)期使用易使病原菌產(chǎn)生抗藥性。

因此，有必要尋找一種更為高效的防治青枯病的化合物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，提供環(huán)二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile在防治青枯病中的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：環(huán)二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile在防治青枯病中的應(yīng)用，其中，環(huán)二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile的結(jié)構(gòu)式如式I所示：

所述的環(huán)二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile通過(guò)如下步驟制備得到：

(1)將大腸埃希氏菌GZ-34進(jìn)行發(fā)酵，得到的發(fā)酵液進(jìn)行固液分離；在得到的上清液中加入乙酸乙酯進(jìn)行萃取，收集上層有機(jī)相，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后溶解在甲醇中，用孔徑為0.22μm的濾膜去除不溶物，得到含活性成分的有機(jī)溶液I；

(2)用葡聚糖凝膠LH-20裝柱，將含活性成分的有機(jī)溶液I上樣，通過(guò)葡聚糖凝膠LH-20吸附活性成分；再用甲醇洗脫，每收集250ml甲醇洗脫液為一個(gè)組分；收集第4個(gè)組分，經(jīng)過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后溶解在甲醇中，過(guò)0.22μm的濾膜去除不溶物。

(3)對(duì)步驟(2)去除不溶物的餾分4進(jìn)行半制備高效液相層析；其中，溶劑A相為0.1％(v/v)甲酸，溶劑為色譜純水；溶劑B相為色譜純乙腈；洗脫程序?yàn)椋?0％B，0-30min；30％B到100％B，30-30.1min；100％B，30.1-42min；100％B到30％B，42-42.1min；30％B，42.1-50min；流速為3.0mL min^-1，收集第26-29min的洗脫液，凍干，得到環(huán)二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile。

步驟(1)中所述的大腸埃希氏菌GZ-34，保藏編號(hào)為CCTCC NO:M 2016353，于2016年6月27日保藏于位于中國(guó)武漢武漢大學(xué)的中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，已在中國(guó)專利申請(qǐng)CN 105969707 A公開。