[發明專利]環二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile在防治青枯病中的應用

有效

• 申請號: 201710717668.1
• 申請日: 2017-08-21
• 公開（公告）號: CN107624768B
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發明（設計）人: 鄧音樂;宋施豪;付書娜;孫秀云;鄧海飛;神方芳
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: A01N43/90
• 分類號: A01N43/90;C07D487/04;C12P17/18;A01P1/00;C12R1/19
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞

1.環二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile在防治青枯病中的應用。

2.根據權利要求1所述環二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile在防治青枯病中的應用，其特征在于：所述的環二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile通過如下步驟制備得到：

(1)將大腸埃希氏菌GZ-34進行發酵，得到的發酵液進行固液分離；在得到的上清液中加入乙酸乙酯進行萃取，收集上層有機相，經旋轉蒸發后溶解在甲醇中，用孔徑為0.22μm的濾膜去除不溶物，得到含活性成分的有機溶液I；

(2)用葡聚糖凝膠LH-20裝柱，將含活性成分的有機溶液I上樣，通過葡聚糖凝膠LH-20吸附活性成分；再用甲醇洗脫，每收集250ml甲醇洗脫液為一個組分；收集第4個組分，經過旋轉蒸發后溶解在甲醇中，過0.22μm的濾膜去除不溶物；

(3)對步驟(2)去除不溶物的餾分4進行半制備高效液相層析；其中，溶劑A相為0.1％(v/v)甲酸，溶劑為色譜純水；溶劑B相為色譜純乙腈；洗脫程序為：30％B，0-30min；30％B到100％B，30-30.1min；100％B，30.1-42min；100％B到30％B，42-42.1min；30％B，42.1-50min；流速為3.0mL min^-1，收集第26-29min的洗脫液，凍干，得到環二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile。

3.根據權利要求2所述環二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile在防治青枯病中的應用，其特征在于：步驟(1)中所述的發酵所用的發酵培養基為LB培養基。

4.根據權利要求2所述環二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile在防治青枯病中的應用，其特征在于：步驟(1)中所述的發酵的條件為于35～37℃，200～250rpm發酵。

5.根據權利要求2所述環二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile在防治青枯病中的應用，其特征在于：步驟(1)中所述的發酵的程度為達到大腸埃希氏菌的對數生長期或穩定期。

6.根據權利要求2所述環二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile在防治青枯病中的應用，其特征在于：步驟(1)中所述的固液分離的方式為離心。

7.根據權利要求6所述環二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile在防治青枯病中的應用，其特征在于：所述的離心的條件為8000～12000×g離心10～20min。

8.根據權利要求2所述環二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile在防治青枯病中的應用，其特征在于：步驟(1)中所述的乙酸乙酯的用量為與所述的上清液等體積。

9.根據權利要求2所述環二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile在防治青枯病中的應用，其特征在于：步驟(2)中所述的用葡聚糖凝膠LH-20裝柱中的柱子的柱高為1.0m，柱直徑為5cm。

10.根據權利要求2所述環二肽cyclo-(S)-pro-(R)-Ile在防治青枯病中的應用，其特征在于：步驟(3)中所述的半制備高效液相層析中的柱子為C18半制備柱Phenomenex,Gemini-NX 5μm C18 110A,250×10.0mm。