[發明專利]恒河猴肺纖維化模型的造模方法、制劑、制劑的制備方法、恒河猴肺纖維化模型及其應用

在審

• 申請號: 201710714062.2
• 申請日: 2017-08-18
• 公開（公告）號: CN107469069A
• 公開（公告）日: 2017-12-15
• 發明（設計）人: 曾文;龔立;潘玲珍
• 申請（專利權）人: 四川普萊美生物科技集團有限公司
• 主分類號: A61K38/14
• 分類號: A61K38/14;A61K31/444;A61K49/00
• 代理公司: 成都頂峰專利事務所(普通合伙)51224
• 代理人: 趙正寅

技術領域

本發明涉及恒河猴肺纖維化模型的造模方法、制劑、制劑的制備方法、恒河猴肺纖維化模型及其應用，屬于生物醫藥領域。

背景技術

肺纖維化一般指在毒物、自發免疫反應、藥物副反應、感染、嚴重外傷等不同因素刺激下引起肺部炎癥反應，以肺泡表面上皮細胞損傷，炎性細胞累積，成纖維細胞增生，細胞外基質沉積和疤痕形成為主要特征，最終導致正常肺組織結構改變、功能喪失的一類疾病，是間質性肺疾病的終末結局。該病發病原因不明，目前沒有有效的藥物治療，其預后不良，嚴重影響人類的健康和生活質量。目前肺纖維化動物模型常采用小鼠、大鼠、兔等動物造模，以上動物體型小、體重輕、價格便宜、操作簡單，但仍存在以下幾種問題：

(1)以上動物因其體型太小不適用于影像學檢查(彩超檢查或X光檢查)，只能通過解剖摘取肺部進行組織病理學檢查的方法判斷造模是否成功。

(2)以上動物因其基因、種屬、血液學參數、肺部生理結構與人類相差較大，因此造模后所取得的試驗數據無法與臨床肺纖維化病人的數據進行直接比較。當然使用這些動物模型所評價的治療肺纖維化新藥的藥效結果或毒理結果也無法直接外推至人。

(3)治療肺纖維化是一個漫長的過程，而小鼠、大鼠的壽命一般都比較短，因此可能無法在大、小鼠有效的生命期內看到治療肺纖維化新藥的藥效結果。

發明內容

本發明的目的在于克服上述缺陷，提供恒河猴肺纖維化模型的造模方法、制劑、制劑的制備方法、恒河猴肺纖維化模型及其應用。

恒河猴基因組與人類基因序列相似度為92％～95％，是目前已知的除黑猩猩外，基因組序列與人最接近的靈長類動物，恒河猴的組織器官、內分泌系統、血液學參數等與人類相當接近，使用恒河猴進行實驗研究，所得結果很容易外推于人類。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

恒河猴肺纖維化模型的造模方法，包括如下步驟:

S1、向恒河猴皮下注射百草枯溶液，并向恒河猴氣管滴注博來霉素溶液；

S2、生成恒河猴肺纖維化模型。

使用恒河猴建立肺纖維化模型具有以下優勢或創新點：

(1)對恒河猴皮下注射百草枯后，動物會出現精神萎靡、活動減少、呼吸頻率明顯加快、咳嗽等臨床癥狀，與臨床病人疾病特征相似，以上癥狀在小動物身上無法全面顯現。

(2)恒河猴體型大，血含量高，造模后可每周靜脈采集足夠血液進行血液學檢查而且恒河猴血液學參數與人類相似，造模后可看到紅細胞數和血紅蛋白含量明顯增加，紅細胞分布寬度明顯變大。以上血液學參數變化與臨床肺纖維化病人的相似，目前尚未發現其它動物肺纖維化模型中檢測以上參數。

(3)恒河猴體型大，心臟和肺部組織結構與人類相似，可以通過彩超檢查心尖四腔切面三尖瓣口是否具有三尖瓣返流，從而判斷恒河猴肺部是否已形成肺纖維化。以上彩超判斷方法僅發現在臨床上使用，目前尚未發現在其它肺纖維化動物模型中使用，可以不用將動物剖殺后制成肺部病理切片才能確診動物是否具有肺纖維化。由于該方法是無創的，因此也可以動態的觀察動物的造模情況以及監測給予肺纖維化藥物治療后的效果。

具體地，所述百草枯注射劑量為10mg/kg/次，每周1次，共注射2次；所述博來霉素的使用劑量為1mg/kg/次，每周1次，共使用2次。

在步驟S2之前還包括判斷是否成功生成恒河猴肺纖維化模型的步驟：

觀察恒河猴臨床癥狀、自主活動、采食量、呼吸頻率、體重、血液學指標、彩超檢查及肺部組織病理學結果。

當出現以下癥狀時，表示成功生成恒河猴肺纖維化模型：

a、臨床癥狀：精神萎靡、毛發凌亂，對外界反應降低；

b、自主活動：攀爬、張望及理毛行為的發生率降低；

c、采食量：采食量降低；

d、呼吸頻率：明顯增加；

e、血常規：紅細胞數和血紅蛋白含量明顯增加，紅細胞分布寬度明顯變大；

f、體重：體重降低；

g、彩色超聲：出現三尖瓣反流；

h、肺部組織病理學結果：動物肺臟出現纖維化，肺部整體萎縮，肺泡隔增厚，炎性細胞浸潤，肺泡數量顯著減少，纖維增生明顯。

在所述步驟S1之前，還包括對待建模的恒河猴進行檢疫的步驟，檢疫內容包括體檢、結核桿菌、寄生蟲、沙門氏菌和志賀氏菌試驗。