[發明專利]一種大鼠腎小球系膜細胞分離及培養方法

在審

• 申請號: 201710711746.7
• 申請日: 2017-08-18
• 公開（公告）號: CN109402042A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 江蘇齊氏生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供一種大鼠腎小球系膜細胞分離及培養方法，包括步驟：（a）含雙抗預冷PBS灌洗腎臟；（b）分離腎皮質，剪碎并于重疊篩網上進行研磨，收集篩網上的組織塊，清洗數次；（c）混合酶消化，篩網過濾，收集濾液離心；（d）完全培養基重懸細胞沉淀，接種于處理后的培養瓶中；（e）培養數天后更換混合完全培養基繼續培養；（f）細胞免疫熒光鑒定分離的腎小球系膜細胞。本發明提供了一種操作簡單、高效獲得活性高的大鼠腎小球系膜細胞的方法。

技術領域

本發明屬于細胞生物學領域，具體涉及一種大鼠腎小球系膜細胞分離及培養方法。

背景技術

腎小球系膜是位于腎小球毛細血管袢之間的一種特殊間充質，是腎小球中最活躍的固有成分，由系膜細胞和系膜基質組成。腎小球系膜細胞具有分泌細胞基質、產生細胞因子、吞噬和清除大分子物質及類似平滑肌細胞收縮的功能。腎小球系膜細胞在腎小球損傷和修復過程中起重要作用。系膜細胞的異常增生并伴有大量系膜基質積聚是各種增生性腎小球疾病的特征，本發明提供一種相對完善的腎小球系膜細胞分離培養的方法，為系膜細胞腎小球疾病發病機理研究提供重要研究方法和工具。

發明內容

本發明的目的是建立一種耗時短、高效獲得大鼠腎小球系膜細胞的方法。

為了解決上述所涉及到的問題，本發明采取如下方法獲得大鼠腎小球系膜細胞：

本發明提供一種大鼠腎小球系膜細胞分離及培養方法，包括步驟：（a）含雙抗預冷PBS灌洗腎臟；（b）分離腎皮質，剪碎并于重疊篩網上進行研磨，收集篩網上的組織塊，清洗數次；（c）混合酶消化，篩網過濾，收集濾液離心；（d）完全培養基重懸細胞沉淀，接種于處理后的培養瓶中；（e）培養數天后更換混合完全培養基繼續培養；（f）細胞免疫熒光鑒定分離的腎小球系膜細胞；

可選的大鼠為體重150+30g的正常SD大鼠；

可選的重疊篩網為孔徑分別為80目、100目和200目的不銹鋼篩網；

可選的混合酶液為0.05-0.1%IV膠原酶和0.05-0.1%I型膠原酶，消化時間為15-30min；

可選的多聚賴氨酸濃度為0.1-0.25 mg/ml；

可選的完全培養基為15%FCS和5%FBS的DMEM培養液。

本發明提供原代大鼠腎小球系膜細胞的培養方法，簡化了操作步驟，提高了細胞培養的穩定性和可靠性，可重復性強，為后續實驗和原代大鼠腎小球系膜細胞培養應用奠定了基礎。

附圖說明

圖1培養18d細胞圖片（100×）；

圖2 細胞免疫熒光鑒定圖片。

具體實施方式

為了使本發明的目的及優勢更清晰地展現，現將具體實施方式進一步闡述。此處所闡述的具體實施方式僅針對本發明進行解釋，并不用于限定本發明。

本發明選擇選擇體重150+30g的正常SD大鼠，分離大鼠腎小球系膜細胞。具體操作如下：

1、取正常SD 大鼠，腹腔注射2%戊巴比妥鈉處死大鼠，固定大鼠，酒精消毒皮膚，剪開胸腹腔，以無菌的預冷PBS灌洗腎臟至顏色轉白(全身循環灌洗) ，取出雙腎；

2、在冰上于顯微鏡下迅速地去除腎臟上的包膜、血細胞及結締組織等附著物，將剝離后的腎臟轉至新的PBS緩沖液中清洗3-4次，分離腎皮質和腎髓質；

3、用無菌眼科剪將腎皮質剪碎至約1mm³的小塊，無菌PBS清洗2-3次，1500rpm/min離心5min，棄上清；