[發明專利]一種大鼠腎小球系膜細胞分離及培養方法在審
| 申請號： | 201710711746.7 | 申請日： | 2017-08-18 |
| 公開（公告）號： | CN109402042A | 公開（公告）日： | 2019-03-01 |
| 發明（設計）人： | 不公告發明人 | 申請（專利權）人： | 江蘇齊氏生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 214434 江蘇省無錫市江陰市東*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 腎小球系膜細胞 大鼠 完全培養基 細胞免疫熒光 篩網過濾 細胞沉淀 研磨 混合酶 活性高 培養瓶 腎皮質 組織塊 灌洗 剪碎 篩網 雙抗 預冷 重懸 腎臟 接種 清洗 消化 | ||
【權利要求書】：
1.一種大鼠腎小球系膜細胞分離及培養方法，包括步驟：（a）含雙抗預冷PBS灌洗腎臟；（b）分離腎皮質，剪碎并于重疊篩網上進行研磨，收集篩網上的組織塊，清洗數次；（c）混合酶消化，篩網過濾，收集濾液離心；（d）完全培養基重懸細胞沉淀，接種于多聚賴氨酸包被的培養瓶中；（e）培養數天后更換混合完全培養基繼續培養；（f）細胞免疫熒光鑒定分離的腎小球系膜細胞。
2.根據權利要求1所述的大鼠腎小球系膜細胞分離及培養方法，其特征在于，所述的大鼠為體重150+30g的正常SD大鼠。
3.根據權利要求1所述的大鼠腎小球系膜細胞分離及培養方法，其特征在于，所述步驟b中重疊篩網為孔徑分別為80目、100目和200目的不銹鋼篩網。
4.根據權利要求1所述的大鼠腎小球系膜細胞分離及培養方法，其特征在于，所述步驟c中混合酶為0.05-0.1%IV膠原酶和0.05-0.1%I型膠原酶，消化時間為15-30min。
5.根據權利要求1所述的大鼠腎小球系膜細胞分離及培養方法，其特征在于，所述步驟d的多聚賴氨酸濃度為0.1-0.25mg/ml。
6.根據權利要求1所述的大鼠腎小球系膜細胞分離及培養方法，其特征在于，所述步驟d的完全培養基為含15%FCS和5%FBS的DMEM培養液。
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