[發明專利]基于RT-PCR和RFLP技術鑒別雞傳染性法氏囊病病毒強弱毒株的試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201710703618.8
• 申請日: 2017-08-16
• 公開（公告）號: CN107475445B
• 公開（公告）日: 2021-01-12
• 發明（設計）人: 唐麗杰;周晗;王麗;徐義剛;李一經;韓冰;林慶宇
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12Q1/683;C12R1/93
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

本發明公開了一種基于RT?PCR和RFLP技術鑒別雞傳染性法氏囊病病毒強弱毒株的試劑盒及其應用。所述的試劑盒含有用于擴增雞傳染性法氏囊病病毒VP2基因的引物對以及SpeI、SacI和StuI限制性內切酶。本發明所建立的基于RT?PCR和RFLP技術的鑒別診斷方法能夠區分IBDV的超強毒株和弱毒株，且步驟簡單便于操作，本發明的提出為IBDV強弱毒株的快速鑒別診斷提供了一種新的有效技術手段。

技術領域

本發明涉及一種鑒別雞傳染性法氏囊病病毒強弱毒株的試劑盒及其應用，特別涉及一種基于RT-PCR和RFLP技術鑒別雞傳染性法氏囊病病毒強弱毒株的試劑盒及其應用。本發明屬于病毒檢測技術領域。

背景技術

雞傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus，IBDV)引起雞的急性、高度接觸性、殺淋巴細胞性傳染病。IBD主要感染對象為3～6周齡雞，主要侵害中樞免疫器官法氏囊，導致免疫抑制。IBDV有兩種不同的類型，被稱作血清I型和血清II型。血清I型病毒對雞致病；血清II型從火雞中分離，對雞無致病力。IBDV血清I型分離株在法氏囊細胞中的毒力和復制效率有不同的程度。病毒在增殖率和致病性上存在差異，按毒力可分為經典毒株或弱毒疫苗株(cIBDV)、變異株(vIBDV)和超強毒株(vvIBDV)等不同類型。

雛雞接種疫苗是控制IBD的主要防控策略。然而近年來變異毒株和超強毒株的出現，又使本病的發生和流行出現了新的特點，從而加重了對養禽業的危害。國內外學者對IBD的防治進行了大量的研究工作，研制并開發了多種疫苗，但應用最普遍的還是傳統的弱毒疫苗，但超強毒株出現后便暴露出許多問題。由于未能有效控制超強毒蔓延，本病的發病率和死亡率均大幅升高，造成的經濟損失巨大。因此建立一種快速、敏感、準確的區分強毒和弱毒的診斷技術對雞傳染性法氏囊病的防控將非常關鍵。

近些年來，針對IBDV的各種診斷技術已經應用到了對IBDV毒株的區分和診斷上。已經采用過ELISA試驗、病毒中和試驗(VNT)，實時RT-PCR和瓊脂凝膠沉淀試驗(AGPT)來檢測和區分各種IBDV毒株，但還是缺乏敏感、特異以及快速區分超強毒株和弱毒株，尤其是區分感染與免疫的臨床檢測方法。而RT-PCR結合限制性內切酶檢測方法本身就具有簡單快捷和準確等優點，是一種值得推廣的IBDV檢測方法。此檢測方法，從取樣、RNA提取、RT-PCR、酶切、產物凝膠電泳分析，全程只需極短的時間便可完成。該方法不但能夠檢測人為感染的雞胚尿囊液與細胞培養物，而且可直接檢測臨床組織病料，所以，該方法是一種特異、快速、敏感和實用的IBD檢測技術。因此，建立區分IBDV強弱毒株的診斷技術，為獲得IBDV流行病學信息提供基礎，亦為制定疫苗接種策略來控制疾病提供有力的幫助。

發明內容

本發明的目的在于提供一種能夠快速鑒別診斷IBDV超強毒株和弱毒株的試劑盒及其檢測方法。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術手段：