[發(fā)明專利]一種檢測(cè)微囊藻毒素MC-LR時(shí)間分辨熒光免疫定量POCT試紙條

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710699013.6
• 申請(qǐng)日: 2017-08-16
• 公開（公告）號(hào): CN109406784A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 汪勁能
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海雄圖生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種檢測(cè)微囊藻毒素MC-LR時(shí)間分辨熒光免疫定量POCT試紙條，其特征在于其組裝工藝為：先用時(shí)間分辨銪(Eu)熒光微球標(biāo)記抗體，然后將其干燥固定于結(jié)合墊上，再將抗原固定于NC膜上，37℃烘干，最后將樣品墊、熒光微球結(jié)合物墊、NC膜和吸水墊依次搭接于PVC板上，再切成4mm寬的試紙條，轉(zhuǎn)入PVC卡殼，卡殼上設(shè)有與所述樣品墊相配合的加樣孔，和與所述反應(yīng)膜檢測(cè)T線和質(zhì)控C線相配合的讀數(shù)窗口。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述試紙條中微囊藻毒素(MC-LR)鼠單抗時(shí)間分辨銪(Eu)熒光微球標(biāo)記物的制備：取活化后的時(shí)間分辨Eu熒光微球,使用時(shí)100W超聲分散2min, 加入200μg的微囊藻毒素(MC-LR)鼠單抗（MC-LR鼠單抗由上海雄圖生物科技有限公司提供），25℃置于震蕩搖床上140轉(zhuǎn)／分鐘偶聯(lián)反應(yīng)2小時(shí)，加入1% 的牛血清白蛋白BSA溶液50μL 封閉過(guò)夜，最后20000轉(zhuǎn)／分鐘高速離心10分鐘，用0.1mol/L硼酸緩沖液洗滌2-3次，置于4-8℃冰箱中保存?zhèn)溆茫順?biāo)記兔IgG，制成兔IgG時(shí)間分辨銪(Eu)的熒光微球標(biāo)記物。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述試紙條中關(guān)鍵為結(jié)合墊制備，其特征在于：首先用含2.5% ( m/v）海藻糖、1% (m/v）牛血清白蛋白、1% ( v/v )tween-20的 0.1 mol/L pH7.4 的磷酸緩沖液浸泡熒光結(jié)合墊玻璃纖維素膜，然后置于37℃烘箱中烘干2小時(shí)，再將0.05 mg/mL微囊藻毒素MC-LR鼠單抗時(shí)間分辨銪(Eu)熒光微球標(biāo)記物和0.1 mg/mL兔IgG時(shí)間分辨銪(Eu)的熒光微球標(biāo)記物，用噴金儀噴于處理烘干后的結(jié)合墊上，在37℃烘箱中干燥過(guò)夜，置于密封干燥包裝袋中保存?zhèn)溆谩?/p>

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述試紙條中關(guān)鍵技術(shù)NC反應(yīng)膜的制備：用含有0.5% ( m/v）牛血清白蛋白、2.5%蔗糖溶液的 0.01 mol/L pH7.4 的磷酸緩沖溶液，將微囊藻毒素 MC-LR抗原配制成濃度0.05 mg/mL，用噴膜機(jī)噴涂在硝酸纖維素膜表面，包被成檢測(cè)線 T線，同樣用含有1% ( m/v）牛血清白蛋白、2.5%蔗糖溶液的 0.01 mol/L pH7.4 的磷酸緩沖溶液，將羊抗兔二抗配制成0.1 mg/mL，用噴膜機(jī)噴涂在距離T線右邊4mm處，包被成質(zhì)控線C線，將噴涂好的硝酸纖維素膜 37℃烘干過(guò)夜，置于室溫干燥環(huán)境中保存?zhèn)溆谩?/p>

5.用微囊藻毒素MC-LR時(shí)間分辨熒光免疫定量POCT試紙條檢測(cè)樣品的過(guò)程，其特征在于先將時(shí)間分辨熒光免疫定量POCT分析儀（上海雄圖生物科技有限公司提供）開機(jī)預(yù)熱5分鐘，插入本批次產(chǎn)品所對(duì)應(yīng)的ID卡，將本發(fā)明的試紙條平放于桌面上，取100μL待測(cè)水樣或水產(chǎn)品的提取液，滴加到試紙條的加樣孔中，37℃孵育，計(jì)時(shí) 5分鐘，插入時(shí)間分辨熒光免疫定量POCT分析儀卡槽中 ，按檢測(cè)鍵即可進(jìn)行自動(dòng)檢測(cè)計(jì)算和讀數(shù)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程僅需5min，檢測(cè)限0.05ppb，定量線性范圍為 0-10ppb。